神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的酵母雙雜交研究.pdf

1、該研究以RET的胞內(nèi)域RET<'IC>作為誘餌蛋白,篩選酵母雙雜交人腦文庫(kù),獲得SH2-B蛋白.通過β-半乳糖苷酶活力檢測(cè),驗(yàn)證了這兩個(gè)蛋白在酵母中確實(shí)存在結(jié)合.轉(zhuǎn)染細(xì)胞的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)表明,在GDNF刺激后RET可與SH2-B結(jié)合;細(xì)胞分化觀察顯示,RET與SH2-B的結(jié)合可能參與GDNF刺激引起PC12細(xì)胞分化的信號(hào)通路.以EGFR的胞內(nèi)域EGFR<'IC>作為誘餌蛋白,篩選酵母雙雜交人腦文庫(kù),獲得dok1蛋白.進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)分析和突

2、變研究顯示,dok1可經(jīng)由PTB結(jié)構(gòu)域與EGFR<'IC>結(jié)合,doklPTB結(jié)構(gòu)域內(nèi)的73Y、76L、77R和92R氨基酸殘基可能對(duì)于此結(jié)合很重要.以TrkA的胞內(nèi)域TrkA<'IC>作為誘餌蛋白,篩選酵母雙雜交人腦文庫(kù),獲得TrkA<'IC>-BP1蛋白.通過β-半乳糖苷酶活力檢測(cè)、Leu營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)以及免疫共沉淀等方法,驗(yàn)證了這兩個(gè)蛋白在酵母中確實(shí)存在結(jié)合.序列分析顯示TrkA<'IC>-BP1蛋白含有一個(gè)Rho-GAP的結(jié)構(gòu)