阿薩希毛孢子菌氟康唑耐藥與ERG11基因表達(dá)關(guān)系的研究.pdf

1、研究背景與目的：
　　阿薩希毛孢子菌（Tricrosporon asahii，T.asahii）是引起毛孢子菌感染（Trichosporonosis）的主要致病菌。近年來，隨著抗菌藥物的不規(guī)范使用、免疫抑制劑的廣泛使用以及艾滋病患者的增加，阿薩希毛孢子菌感染的發(fā)病率也越來越高。唑類藥物因其抗真菌譜廣、不良反應(yīng)小等優(yōu)勢被廣泛用于真菌感染，包括毛孢子菌感染的治療。但是，近幾年報道出了毛孢子菌對唑類藥物較高的MIC（Minimum in

2、hibitory concentration）值，甚至是耐藥。ERG11基因編碼的羊毛甾醇14α-去甲基化酶為唑類抗真菌藥物的作用靶點(diǎn)，唑類藥物與其特異性結(jié)合后抑制該酶活性，從而阻遏真菌細(xì)胞膜重要成分——麥角甾醇的合成。既往已有研究顯示ERG11基因突變和或表達(dá)上調(diào)可引起白念珠菌等多種念珠菌以及新型隱球菌等真菌對唑類藥物耐藥。但尚未有關(guān)于ERG11基因表達(dá)在阿薩希毛孢子菌唑類耐藥中作用的研究報道。故本研究欲通過熒光定量PCR（Real-

3、time PCR=q-PCR）技術(shù)檢測多對敏感菌株與耐藥菌株的ERG11基因的表達(dá)情況，探討ERG11基因在阿薩希毛孢子菌唑類耐藥中的作用以及基因表達(dá)量與藥物濃度的關(guān)系。為進(jìn)一步研究阿薩希毛孢子菌的耐藥機(jī)制及新藥靶點(diǎn)的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　通過不斷增加氟康唑藥物濃度方法體外誘導(dǎo)獲得多株阿薩希毛孢子菌耐藥菌株，然后再將敏感菌株與耐藥菌株同時置于含有0~64μg/ml濃度氟康唑的酵母蛋白胨葡萄糖培養(yǎng)基（YPD）中培養(yǎng)，

4、提取RNA，使用q-PCR方法檢測所有受試菌株的ERG11基因的mRNA表達(dá)量。比較該基因在氟康唑敏感菌株與耐藥菌株中的表達(dá)差異，以及在不同濃度氟康唑作用下表達(dá)量的變化。并檢測分析氟康唑體外誘導(dǎo)過程中各菌株ERG11基因表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　共獲得6株體外誘導(dǎo)成功的耐藥菌株。在無藥情況下,阿薩希毛孢子菌耐藥株組ERG11基因表達(dá)（7.542±5.311）高于敏感株組（1.014±0.012），兩組比較t=3.002,

5、p=0.03，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。在不同濃度氟康唑作用下，耐藥株組ERG11 mRNA水平分別為9.183±3.226,13.657±5.428,15.292±7.007,13.720±8.550,13.949±2.960,13.123±6.429，亦高于敏感株組3.281±2.068,3.459±1.923,3.242±2.530,3.651±0.728,3.969±1.924,3.824±1.875,均p<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。但E

6、RG11表達(dá)量與氟康唑濃度之間差異無顯著相關(guān)性（耐藥株rs=0.229,p=0.096;敏感株rs=0.166, p=0.357）。且在誘導(dǎo)耐藥過程中，雖然各受試菌株的ERG11表達(dá)量隨著其對氟康唑的耐藥性上升均呈現(xiàn)出上升趨勢，但只有2株菌株的耐藥性與其ERG11表達(dá)量之間有顯著等級相關(guān)性（BZP902：rs=0.865,p=0.003;BZP705：rs=0.847, p=0.002）。
　　結(jié)論：
　　ERG11基因的表