基于Alzheimer Disease研究炮制方法對何首烏藥效的影響.pdf

1、目的：通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，研究不同炮制方法對何首烏抗AD作用的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：（1）應(yīng)用MTT法，檢測H2O2不同濃度和時間對PC12細(xì)胞損傷以建立AD細(xì)胞模型，以此模型研究何首烏生品、清蒸品和黑豆制品（10mg生藥/mL、5mg生藥/mL、2.5mg生藥/mL）及其含藥血清（血清濃度為20%、10%、5%）對正常PC12細(xì)胞增殖和H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的影響，并用化學(xué)比色法檢測P C12細(xì)胞LDH釋放

2、量、細(xì)胞內(nèi)MDA含量和SOD活性。
　?。?）采用跳臺法考察何首烏生品、清蒸品和黑豆制品（20g生藥/k g、10g生藥/k g、5g生藥/k g）對東莨菪堿、亞硝酸鈉、乙醇分別導(dǎo)致記憶獲得、鞏固、再現(xiàn)障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。
　　（3）小鼠腹腔注射D-半乳糖（120mg/kg）和東莨菪堿（0.5mg/kg）并喂食三氯化鋁（5mg/kg）制備AD小鼠模型。應(yīng)用Morris水迷宮檢測小鼠學(xué)習(xí)記憶能力；化學(xué)比色法檢測小鼠血清

3、S OD、G SH-P X、ALT和AST活力及MDA、Cr和BUN含量；化學(xué)比色法檢測小鼠腦組織SOD、GSH-PX、ChAT、TChE活力和MDA含量；采用HE染色法觀察小鼠腦海馬的病理變化；免疫組織化學(xué)方法觀察小鼠腦海馬淀粉樣蛋白β（Aβ）的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）對PC12細(xì)胞影響：何首烏清蒸品、黑豆制品能顯著升高細(xì)胞內(nèi)SOD活性、降低MDA含量和LDH釋放量（P<0.05)，從而對H2O2致PC12細(xì)胞損傷有保護(hù)作用，且

4、黑豆制品效果較好；生品雖能刺激PC12細(xì)胞增殖，但同時顯著升高M(jìn)DA含量和LDH釋放量（P<0.05)，表明其對P C12細(xì)胞無明顯保護(hù)作用。何首烏生品及不同炮制品含藥血清通過顯著升高細(xì)胞內(nèi)SOD活性、降低MDA含量和LDH釋放量（P<0.05)，對H2O2致 PC12細(xì)胞損傷有保護(hù)作用。
　?。?）對學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的影響：何首烏生品及不同炮制品高劑量可顯著延長東莨菪堿致記憶獲得障礙小鼠潛伏期，并減少小鼠5 min內(nèi)錯誤次數(shù)（P

5、<0.05）；黑豆制品高、中劑量能明顯延長亞硝酸鈉致記憶鞏固障礙小鼠潛伏期，而清蒸品高劑量能明顯減少小鼠5 min內(nèi)錯誤次數(shù)（P<0.05)；生品和黑豆制品高、中劑量能顯著延長乙醇致記憶再現(xiàn)障礙小鼠潛伏期，并減少小鼠5 min內(nèi)錯誤次數(shù)（P<0.05)。
　?。?）對AD小鼠的影響：（1）Morris水迷宮結(jié)果：模型組小鼠表現(xiàn)出明顯的學(xué)習(xí)記憶障礙（P<0.05），何首烏生品及不同炮制品各劑量組小鼠逃避潛伏期較模型組縮短，在原平臺象

6、限的停留時間較模型組增多，清蒸品和黑豆制品中劑量組小鼠穿越原平臺次數(shù)均明顯多于模型組（P<0.05），綜合評價各研究指標(biāo)表明黑豆制品改善AD小鼠學(xué)習(xí)記憶能力優(yōu)于清蒸品和生品。（2）血清檢測結(jié)果：與模型組比較，生品、清蒸品和黑豆制品組小鼠血清 SOD活性顯著升高，MDA含量明顯降低（P<0.05）；清蒸品高劑量和黑豆制品高、中劑量組小鼠血清GSH-Px活性顯著升高（P<0.05）；生品中劑量組小鼠血清ALT水平明顯升高且生品高、中劑量組小

7、鼠血清ALT水平較清蒸品和黑豆制品明顯升高（P<0.05），表明生品有損傷肝臟的不良反應(yīng)；且生品高、中劑量組小鼠血清中Cr、BUN水平較清蒸品和黑豆制品有升高的趨勢，提示其有一定的腎臟損傷的不良反應(yīng)。從總體趨勢看，黑豆制品和清蒸品提高機(jī)體抗氧化防御體系功能優(yōu)于生品，且未表現(xiàn)出肝、腎損害的不良反應(yīng)。（3）腦組織檢測結(jié)果：與模型組比較，生品、清蒸品和黑豆制品組小鼠腦內(nèi)SOD和GSH-Px活性顯著升高，MDA水平明顯降低（P<0.05），其中

8、清蒸品和黑豆制品低劑量組小鼠腦內(nèi)MD A水平明顯低于生品（P<0.05）；生品高劑量和黑豆制品高、中劑量組小鼠腦內(nèi)C hAT水平明顯升高（P<0.05）；生品中劑量組小鼠腦內(nèi)TChE水平明顯降低（P<0.05），綜合評價各項(xiàng)指標(biāo)表明黑豆制品增強(qiáng)小鼠腦組織抗氧化能力優(yōu)于生品和清蒸品，黑豆制品和生品均能顯著增強(qiáng)小鼠中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)功能，生品作用稍強(qiáng)。（4）HE和IHC結(jié)果：與模型組比較，生品、清蒸品、黑豆制品各組小鼠海馬CA1區(qū)損傷神經(jīng)元

9、細(xì)胞得到明顯恢復(fù)；黑豆制品中劑量和清蒸品高、中劑量組小鼠海馬 CA1區(qū) Aβ表達(dá)水平顯著降低（P<0.05），表明黑豆制品和清蒸品通過抑制Aβ過度表達(dá)來保護(hù)小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞作用優(yōu)于生品。
　　結(jié)論：何首烏生品、清蒸品和黑豆制品通過改善小鼠學(xué)習(xí)記憶能力、提高機(jī)體抗氧化防御體系的機(jī)能、增強(qiáng)小鼠腦組織抗氧化能力、增強(qiáng)中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)功能和抑制Aβ對小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞損傷等方面發(fā)揮抗AD作用，但長期使用何首烏生品可延緩小鼠體重的增長，并