基于肝細胞毒價檢測的何首烏質量控制方法研究.pdf

1、何首烏為蓼科植物何首烏Polygonum multiflorum Thunb.的干燥塊根，是一味傳統(tǒng)的補益類中藥，臨床應用廣泛。但是近年來國內(nèi)外相繼出現(xiàn)了關于何首烏導致肝損傷的臨床報道，引起人們的高度關注。前期調研發(fā)現(xiàn)藥材質量問題是其引發(fā)肝損傷的重要原因之一。然而何首烏現(xiàn)有的質量控制方法主要是基于指標性成分的含量測定，這些質控指標與安全性關聯(lián)還不夠緊密，尤其是還無法控制炮制減毒的過程，難以保障臨床用藥安全。因此，何首烏的質量控制方法和手

2、段還有待拓展。
　　 本文從生物檢定的角度，探索建立何首烏肝細胞毒價檢測方法，以期更準確的表征藥材整體的肝毒性。為從藥材質量問題層面降低何首烏臨床肝損害的發(fā)生提供方法學支持。本研究主要內(nèi)容及結果如下:
　　 1.肝細胞毒價檢測方法的研究:根據(jù)何首烏產(chǎn)生肝損傷作用的藥理特征，以正常人肝細胞系（L02細胞）作為研究對象，以細胞抑制率作為檢測指標。通過對照品，藥材提取方法，檢測方法及檢測條件的篩選和優(yōu)化:選定對乙酰氨基酚為對照

3、品;50％的乙醇，10倍量溶劑，超聲30 min制備藥材供試品;CCK-8法檢測細胞抑制率，其條件為3.5×104個·mL-1的細胞進行接種，藥物孵育24 h，5％的CCK-8反應60 min后檢測吸光度。細胞抑制率進行三次方的數(shù)據(jù)轉化，采用量反應平行線(2·2)法計算樣品毒價。
　　 2.基于肝細胞毒價的何首烏炮制減毒研究:10批不同產(chǎn)地的生首烏毒價均值為329 U·g-1，毒價差異較小(RSD=8％)。而18種自制何首烏炮制

4、品毒價檢測結果顯示，樣品毒價均隨著炮制時間的增加而降低，并且最終趨于穩(wěn)定。同時還發(fā)現(xiàn)高壓清蒸法炮制2個小時后，樣品毒價降低到135 U·g-1，并且已經(jīng)基本穩(wěn)定。與常壓清蒸法和高壓黑豆汁蒸法相比，高壓清蒸法不僅對毒性的降低作用較為明顯，同時效率也較高。
　　 3.市售藥材及相關中成藥的毒價檢測:通過對2個臨床已產(chǎn)生肝損害的制何首烏藥材進行檢測，結果顯示2個樣品的毒價均較高，其中1個接近生首烏的毒價，為297 U·g-1，說明藥材