烏藥、錦燈籠藥效物質(zhì)及質(zhì)量評價方法研究.pdf

1、中藥藥效物質(zhì)不清楚、質(zhì)量評價方法不可靠以及作用機(jī)制不明確是目前制約中藥現(xiàn)代化進(jìn)程的主要因素。為此，本論文圍繞中藥藥效物質(zhì)、質(zhì)量控制及藥代動力學(xué)三個方面，以烏藥和錦燈籠為研究載體，綜合運(yùn)用多種研究模式和現(xiàn)代儀器分析手段，對烏藥保肝作用以及錦燈籠抗炎作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行了研究，建立了兩種藥材的質(zhì)量評價方法，并初步探明了錦燈籠相關(guān)藥效成分的藥代動力學(xué)性質(zhì)。本論文主要研究內(nèi)容及學(xué)術(shù)貢獻(xiàn)如下：
　　 1.利用現(xiàn)代色譜分離方法對浙江臺州道

2、地藥材烏藥的95％乙醇提取物進(jìn)行了系統(tǒng)分離，共分得13個化合物，并根據(jù)其理化性質(zhì)和現(xiàn)代波譜學(xué)技術(shù)(包括UV、IR、1H NMR、13C NMR、HMQC、HMBC、NOESY、COSY和HRMS等)鑒定了它們的結(jié)構(gòu)，分別為Linderagalactone B(1)，Linderagalactone D(2)，Linderagalactone E(3)，3-eudesmene-1β，11-diol(4)，Linderagalactone

3、A(5)，Linderagalactone C(6)，羥基香樟內(nèi)酯(7)，Strychnistenolide(8)，8-hydroxyisogermafurenolide(9)，AtractylenolideⅢ(10)，烏藥內(nèi)酯(11)，烏藥醚內(nèi)酯(12)和新烏藥內(nèi)酯(13)，除化合物4外，其余均為倍半萜內(nèi)酯類化合物，化合物1、2、3、5和6為新化合物。另外，通過人肝細(xì)胞(HepG2)H2O2損傷模型對所得化合物的保肝活性進(jìn)行了篩選，發(fā)

4、現(xiàn)大部分化合物均具有肝細(xì)胞保護(hù)活性，其中化合物3、7、11和12活性較好。本研究初步揭示了烏藥保肝作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，并發(fā)現(xiàn)了5個新化合物，從而為烏藥相關(guān)新藥的開發(fā)和其合理質(zhì)量評價方法的建立提供了科學(xué)依據(jù)。
　　 2.建立了錦燈籠抗炎活性部位及其灌胃給藥后大鼠血漿的HPLC-DAD指紋圖譜分析方法，比較給藥前后大鼠血漿成分的變化情況，發(fā)現(xiàn)提取物灌胃后被大鼠吸收入血的成分有20多個。以給藥后血漿指紋圖譜為指導(dǎo)，定向地從錦燈籠提取物

5、中分離制備錦燈籠血中移行成分，進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果分離得到9個化合物，并鑒定了它們的結(jié)構(gòu)，其中7個為酸漿苦素類化合物。通過體外細(xì)胞炎癥模型篩選，并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)調(diào)研，確定酸漿苦素類化合物為錦燈籠抗炎藥效的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。本研究對進(jìn)一步建立錦燈籠合理的質(zhì)量評價方法和探索其藥代動力學(xué)性質(zhì)具有重要的指導(dǎo)意義。
　　 3.采用UPLC-ESI-MS/MS技術(shù)，分別建立了烏藥和錦燈籠中5個倍半萜類和5個酸漿苦素類藥效成分的定量分析方法，經(jīng)相應(yīng)的

6、方法學(xué)考察，證明所建方法分析速度快，且準(zhǔn)確、穩(wěn)定、可靠，并將所建方法成功應(yīng)用于不同產(chǎn)地藥材中相關(guān)成分的定量分析和質(zhì)量評價。此外，還對4，7-二脫氫新酸漿苦素B的3個轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進(jìn)行了鑒定。研究證明本文所建方法可用于相關(guān)藥材及其制劑的質(zhì)量評價；而且，本研究還拓展了UPLC-MS/MS技術(shù)在中藥定量分析領(lǐng)域的應(yīng)用范圍，為烏藥與錦燈籠的合理質(zhì)量評價提供了新的分析方法。
　　 4.運(yùn)用UPLC-DAD-ESI-MS/MS技術(shù)，分別建立了烏藥

7、和錦燈籠活性部位的指紋圖譜質(zhì)量評價方法和主要指紋峰質(zhì)譜裂解規(guī)律及結(jié)構(gòu)鑒定的質(zhì)譜分析方法。從烏藥提取物中定性鑒別出3個生物堿類化合物和8個倍半萜及其內(nèi)酯類化合物；總結(jié)了酸漿苦素類化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律，從錦燈籠活性提取部位定性鑒別出19個化合物，其中14個為酸漿苦素類化合物。最后運(yùn)用所建立的UPLC分析方法結(jié)合相似度分析和主成分分析(PCA)，分別對采集到的13批烏藥和31批錦燈籠樣品的品質(zhì)進(jìn)行了評價。本研究為倍半萜和酸漿苦素類化合物的快速

8、發(fā)現(xiàn)提供了參考數(shù)據(jù)，為烏藥和錦燈籠的質(zhì)量控制提供了新的評價方法，并且為UPLC-MS/MS技術(shù)在中藥及其復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)快速分析鑒定中的應(yīng)用提供了借鑒和參考。
　　 5.運(yùn)用UPLC-ESI-MS/MS技術(shù)，以錦燈籠中的酸漿苦素D、酸漿苦素G和4，7-二脫氫新酸漿苦素B為該藥材的代表性藥效成分，研究了錦燈籠提取物在大鼠灌胃給藥和主要成分尾靜脈注射時的藥代動力學(xué)性質(zhì)?？疾炝?，7-二脫氫新酸漿苦素B與鼠肝微粒體孵育時產(chǎn)生的Ⅰ相代謝產(chǎn)物