錦燈籠宿萼皂苷免疫增強(qiáng)作用及降血糖活性研究.pdf

1、錦燈籠為茄科植物酸漿（PhysalisalkekengiL．Var．franchetii）的干燥宿萼或帶果實(shí)的宿萼。宿萼紅色或橙紅色，微苦。又名掛金燈、紅姑娘。文獻(xiàn)對(duì)錦燈籠果實(shí)的報(bào)道較多，但對(duì)其宿萼的報(bào)道較少。本文以成熟的錦燈籠果實(shí)宿萼為實(shí)驗(yàn)材料，分離純化錦燈籠皂苷并對(duì)該皂苷的免疫活性和降血糖活性進(jìn)行初步研究，為將錦燈籠宿萼皂苷開發(fā)為新型疫苗佐劑及降血糖藥物奠定了理論基礎(chǔ)。 錦燈籠宿萼皂苷的分離純化：成熟的錦燈籠果實(shí)宿萼，先將其

2、粉碎，經(jīng)乙醇回流提取、減壓濃縮、水飽和正丁醇萃取、將正丁醇層減壓濃縮、少量甲醇溶解、乙醚沉淀干燥得到粗皂苷，再經(jīng)D101大孔樹脂進(jìn)一步分離純化錦燈籠宿萼皂苷（TSP），經(jīng)三氯醋酸、氯仿．濃硫酸、醋酐－濃硫酸等方法顯色鑒定TSP為甾體皂苷。本文以TSP為實(shí)驗(yàn)材料，進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)活性研究。 本文選用0．5％的兔紅細(xì)胞來檢測(cè)TSP及QuilA的溶血活性。溶血性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TSP在濃度為500μg/ml時(shí)溶血率為3．5％，有輕微

3、的溶血性，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于QuilA（HD50約為16．6μg/ml）的溶血性。 以O(shè)VA作為抗原與Alum（鋁佐劑）（200μg）、QuilA（10，20μg）、TSP（12．5，25，50μg）共同對(duì)ICR小鼠進(jìn)行皮下免疫，以O(shè)VA作為陰性對(duì)照，Alum、QuilA作為陽性對(duì)照組來檢測(cè)TSP對(duì)OVA免疫小鼠細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答的影響。（1）TSP對(duì)免疫小鼠細(xì)胞免疫應(yīng)答的影響：通過對(duì)免疫小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)、CD4+和CD8+T淋

4、巴細(xì)胞亞群的含量變化以及對(duì)遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH）的實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析表明，TSP與QuilA一樣顯著增強(qiáng)了細(xì)胞免疫應(yīng)答，其作用效果優(yōu)于鋁佐劑；（2）TSP對(duì)免疫小鼠體液免疫應(yīng)答的影響：ELISA方法檢測(cè)小鼠抗血清中抗OVA特異性抗體的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，TSP與QuilA一樣顯著提高了IgG、IgG1及IgG2b的抗體滴度；鋁佐劑只對(duì)IgG、IgG1有明顯的增強(qiáng)作用，對(duì)IgG2b的抗體滴度沒有影響，證明TSP與QuilA一樣顯著增強(qiáng)了體液免疫應(yīng)答