抗菌肽Cecropin B-腫瘤血管生長抑制因子Kringle5融合蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究主要通過基因重組的方法，將CecropinB和腫瘤血管生長抑制因子Kringle5的編碼基因連接到高效的大腸桿菌表達(dá)載體pET32a上進(jìn)行融合表達(dá)。首先根據(jù)GenBank中抗菌肽CecropinB基因序列和相關(guān)資料，利用大腸桿菌偏愛密碼子設(shè)計(jì)抗菌肽CecropinB基因序列，將整個(gè)基因劃分為A、B、C、D共4個(gè)片段，分別合成。通過重疊區(qū)擴(kuò)增法(Genesplicingmethodofoverlapextension，geneSOE

2、ing)合成完整的天蠶抗菌肽基因。根據(jù)腫瘤血管生長抑制因子Kringle5基因上下游的堿基序列設(shè)計(jì)上下游引物，通過PCR以已有的含有該基因的質(zhì)粒為模板擴(kuò)增出完整的Kringle5基因。將PCR擴(kuò)增出來的CB基因、K5基因和表達(dá)性載體pET32a分別用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶切割后，凝膠電泳回收目的條帶，然后用T4DNA連接酶將三者連接。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞BL21(DE3)中，經(jīng)酶切鑒定和測序，表明CB-K5基因已經(jīng)正確地連接到p

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