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文檔簡介
1、研究背景與目的：VEGF-B作為一個重要的細胞內(nèi)皮生長因子，具有多種重要的生理功能。 本研究通過克隆人VEGF-B cDNA來構(gòu)建原核表達載體，并進行高效表達和純化，利用基因工程技術(shù)來生產(chǎn)重組蛋白。 材料與方法：根據(jù)GenBank中人VEGF-B成熟態(tài)的cDNA序列，結(jié)合表達載體pET-28a的特點設(shè)計、合成一對特異性引物。采用PCR的方法擴增人成熟VEGF-B蛋白cDNA片段，然后將其定向克隆到載體pET-28a中，構(gòu)
2、建原核表達重組載體pET-28a-VEGF-B；重組載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α擴增、提取后，用PCR、限制性內(nèi)切酶酶切以及DNA序列測定等方法進行鑒定。鑒定正確的陽性pET-28a-VEGF-B重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，通過K+抗性篩選獲得穩(wěn)定表達的陽性工程菌；以IPTG誘導(dǎo)工程菌高效表達重組蛋白VEGF-B，利用His-tag親合層析、瓊脂糖凝膠層析對重組VEGF-B蛋白進行分離純化。 結(jié)果： 1、成功的構(gòu)
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