血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在急性白血病中表達(dá)的研究.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在急性白血病中表達(dá)的研究姓名：崔華東申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：何娟20030301離心涂片枧作纓照涂片，～∞℃保存，采用SAP方法檢測(cè)。保存的纓胞涂片玲孬嗣鼴定lO分鐘，如羊盤(pán)漶室濕封閉30分鐘，然麓加入∞心兔抗人V囂GF多抗(1：100)37℃孵育2小時(shí)，再依次鴦鼙入生物素億羊撬兔二抗翻SAP復(fù)合物37℃孵育30分錚，堅(jiān)固紅顯色5一10分鐘，蘇本素復(fù)染2分鐘。以PBS代替一撬終熙性

2、對(duì)照。光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察計(jì)數(shù)帑性綱驄數(shù)。綱胞漿染成淡粉色至深蘊(yùn)色酶秀鼯性纓艟，陽(yáng)性纓施數(shù)大手∞％判定勢(shì)疆性。西、流式纘穩(wěn)米方法檢測(cè)VEGF表達(dá)量對(duì)其中30鍘白斑病標(biāo)本和9鑲對(duì)照組標(biāo)本應(yīng)耀流式細(xì)憨術(shù)方法檢測(cè)VEGF豹表達(dá)量。分離酶單個(gè)棱纓胞，70％冷乙醇匿定，一20℃保存。檢測(cè)時(shí)4℃離心棄乙醇，PBS洗兩次，l％小牛盤(pán)漬封閉弼分鋅，加入兔抗入VEGF多抗(終濃度l：100)塞溫孵寅2小時(shí)，PBS洗兩次后褥加入疆％標(biāo)記的羊抗兔二擾(終濃度1：

3、100)室溫避光孵育30分事＆PBS洗兩次，重新懸浮緬脆，上槐檢測(cè)。以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。以平均熒光強(qiáng)度(Meanfluole$ceIlCeintensity，MFI)表示VEGF的表達(dá)量：MFI=加一抗細(xì)胞的熒光強(qiáng)度一陰性對(duì)照綱耱的熒光強(qiáng)度。五、流式細(xì)脆術(shù)進(jìn)行細(xì)施髑期分析70％冷乙醇固定的細(xì)胞4。C離心棄乙醇，PBS洗兩次；掇入l礎(chǔ)含RNA酶(200“∥蕊)的PBS，37℃孵育30分鐘，離心棄RNA酶，冷PBS浼兩次；加入含碘化