Angiopep-2介導的雙靶向納米載體的研究及其在大鼠C6膠質(zhì)瘤MR顯像中的價值.pdf

1、研究背景及目的
　　腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的腫瘤，大部分具有浸潤生長的特點，且由于血腦屏障（Brain blood barrier，BBB）的存在使對比劑不能進入腫瘤部位，術(shù)中邊界難確定，故膠質(zhì)瘤術(shù)后易復發(fā)、預后差。因而早期診斷、腫瘤輪廓的顯示成為影響預后的關(guān)鍵因素。隨著納米技術(shù)的迅速發(fā)展，將對比劑絡合納米粒子聚合物成靶向?qū)Ρ葎┖螅軌虼┩秆X屏障、與腫瘤特異性結(jié)合、延長對比劑半衰期，為腦膠質(zhì)瘤的早期診斷提供可能，大大推動了腦腫瘤影

2、像學早期成像的發(fā)展。在本研究中，我們合成了一種多功能的靶向?qū)Ρ葎ㄅc血管內(nèi)皮及腦膠質(zhì)瘤細胞特異性結(jié)合的配體Angiopep2、磁共振成像部分(Gd3+)和熒光體外成像部分(FITC)。本實驗旨在對比劑能穿透血腦屏障并聚集于腦膠質(zhì)瘤所在部位，同時利用非侵襲性MRI技術(shù)追蹤其體外細胞攝取，動態(tài)觀察腫瘤的顯像時間及輪廓邊界。這種兼具血管及腫瘤雙靶向功能的納米技術(shù)，利用影像學早期診斷腫瘤并評價腫瘤預后（包括術(shù)前和術(shù)后殘留隨訪）的效果，為中樞

3、神經(jīng)系統(tǒng)疾病的術(shù)前診斷提供了一些新的思路，將有助于膠質(zhì)瘤預后的改善。
　　材料與方法
　　1.雙靶向納米聚合物的合成和特征：高分子納米聚合物聚N,N-二乙基丙烯酰胺的合成；將TE固定，測定不同TR值下，Gd3+濃度分別為0-0.06mmol/l的Ang-NP-Gd和alkymyl-DOTA-Gd的信號強度，比較兩者的弛豫率；將C6與不同濃度的NP和Ang-NP培養(yǎng)48h后，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定570nm下的吸光度，比較兩組

4、的細胞存活率與濃度的關(guān)系。
　　2.體外雙級靶向性評價：用流式細胞儀測定C6細胞、血管內(nèi)皮細胞分別與標有FITC的靶向?qū)Ρ葎┖头前邢驅(qū)Ρ葎┡囵B(yǎng)30min、4h、24h后的熒光強度；分A組NP-FITC，B組Ang-NP-FITC，C組C6細胞球與Angiopep-2作用60min后，再加Ang-NP-FITC；用流式細胞儀測定C6膠質(zhì)瘤腫瘤球與三組作用30min、4h、24h時的熒光強度。
　　3.動物實驗：18只清潔級雄性

5、SD大鼠，約250-280 g；將對數(shù)生長期鼠C6膠質(zhì)瘤細胞注入大鼠右側(cè)尾狀核，建立大鼠C6腦內(nèi)膠質(zhì)瘤模型；測量并繪出不同時間時對應的腫瘤最大層面的體積大小的曲線；腦膠質(zhì)瘤模型建立后第4-20天分別用Ang-NP-Gd和DOTA-Gd增強掃描，1.5T MRI掃描采集的圖像傳至adw4.4工作站，在腫瘤最大層面測量不同時間腫瘤強化程度、腫瘤邊界、CNR；剝離大鼠腦腫瘤完整下來并行HE染色。
　　結(jié)果：
　　1. Ang-NP

6、-Gd的弛豫率明顯高于alkymyl-DOTA-Gd；靶向和非靶向?qū)Ρ葎6細胞的毒性可忽略。
　　2. C6細胞及血管內(nèi)皮細胞對Ang-NP-FITC有明顯的攝?。籆6腫瘤球?qū)θM攝取率順序為：Ang-NP-FITC＞NP-FITC＞Ang-NP-FITC+Angiopep-2。
　　3.腫瘤體積大小與時間呈指數(shù)關(guān)系；Ang-NP-Gd能使腫瘤早期強化，邊界較DOTA-Gd更清晰；CNR隨時間增大，在12h達峰值。