戊酸雌二醇調(diào)節(jié)ER-α及TGF-β1、MMP9在預(yù)防及治療大鼠宮腔粘連中的作用探討.pdf

1、宮腔粘連（intrauterine adhesions，IUA）是指各種原因的創(chuàng)傷，如刮宮、感染、電灼等導(dǎo)致子宮內(nèi)膜基底層損傷，子宮壁瘢痕愈合，使宮腔和（或）宮頸管腔閉鎖，子宮失去原有生理功能的一種疾病。該病最早于1894年報(bào)道，1948年Asherman首次系統(tǒng)的報(bào)道了流產(chǎn)和產(chǎn)后刮宮導(dǎo)致的宮腔粘連病例，并將該病命名為“損傷性閉經(jīng)(traumatical amenorrhea)”。IUA的癥狀主要有閉經(jīng)、痛經(jīng)、不孕，即使通過治療后成功自

2、然妊娠，患者于孕期也容易發(fā)生流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎盤粘連、產(chǎn)后出血、胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩、胎兒畸形等嚴(yán)重的產(chǎn)科并發(fā)癥，給患者帶來經(jīng)濟(jì)及心理負(fù)擔(dān)的同時(shí)，也給醫(yī)務(wù)工作者帶來了嚴(yán)峻的考驗(yàn)。IUA的發(fā)病原因多為人工流產(chǎn)、早孕及中晚孕期清宮術(shù)、宮腔鏡手術(shù)等造成。IUA的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，研究假說眾多，如纖維化增生過度學(xué)說、神經(jīng)反射學(xué)說、子宮內(nèi)膜干細(xì)胞分化異常等，研究最為廣泛的當(dāng)屬纖維化增生過度學(xué)說。IUA的病理學(xué)改變包括子宮內(nèi)膜組織纖維化、子宮內(nèi)膜腺體減少，

3、這與纖維化性疾病相同，把IUA視為纖維化性疾病研究也是IUA治療的重要突破口。IUA的診斷方法主要依靠宮腔鏡檢查，在直視下能全面評(píng)估官腔形態(tài)、子宮內(nèi)膜分布及損傷程度，是診斷IUA的準(zhǔn)確方法及首選方法。其他的診斷方法，如子宮輸卵管碘油造影、超聲及MRI檢查的益處不明顯。
　　戊酸雌二醇(estradiol valerate，E2V)是目前宮腔粘連分離術(shù)后應(yīng)用雌激素最常用的雌激素制劑，它是天然雌激素17β-雌二醇的合成酯，20世紀(jì)50

4、年代，E2V就已投入臨床應(yīng)用，目前已成為臨床上最常用的雌二醇制劑。E2V主要應(yīng)用于治療雌激素低下性疾病、月經(jīng)紊亂以及子宮內(nèi)膜損傷性疾病，如卵巢早衰、圍絕經(jīng)期綜合征、月經(jīng)不調(diào)及IUA等。本研究就是應(yīng)用E2V作為治療IUA的輔助治療藥物，觀察其治療效果。雌激素受體(estrogen receptors，ERs)是一組廣泛表達(dá)于細(xì)胞內(nèi)外的蛋白質(zhì)，它可以特異性的結(jié)合雌激素，使其被激活并轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)，作用于相應(yīng)的DNA片段，發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。也有

5、最新研究證實(shí)ERs可以不通過與DNA結(jié)合而獨(dú)立發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。ERs可以分為兩種類型:核雌激素受體（屬于細(xì)胞核內(nèi)受體家族）和膜雌激素受體（屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族）。核雌激素受體又分為ER-α和ER-β，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)是一種多效能細(xì)胞生長(zhǎng)因子，它發(fā)揮生物學(xué)作用前的信息轉(zhuǎn)導(dǎo)主要通過Smad蛋白家族完成?；|(zhì)金屬蛋白酶類(MMPs)家族是一組需要金屬元素來催化的蛋白酶，分布廣泛，可由眾多細(xì)胞以非活性狀態(tài)合成，由胞外蛋白酶裂解激

6、活后，對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)成分如膠原蛋白Ⅳ、Ⅴ發(fā)揮降解作用，減少細(xì)胞外基質(zhì)的堆積。因此MMPs的生理作用與TGF-β相反，是一種分解細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白酶，可以降解已形成的纖維化組織。
　　目的：
　　本研究采用機(jī)械和感染雙重?fù)p傷法構(gòu)建SD大鼠IUA動(dòng)物模型，再予以不同劑量的E2V在不同時(shí)期應(yīng)用于IUA大鼠模型，通過檢測(cè)血清E2濃度、觀察子宮內(nèi)膜纖維化面積比、子宮內(nèi)膜腺體計(jì)數(shù)、子宮內(nèi)膜TGF-β1、 MMP-9及ER-α的表達(dá)等一系列變

7、化，評(píng)估雌激素對(duì)IUA的預(yù)防及治療效果，以期更進(jìn)一步的指導(dǎo)臨床試驗(yàn)及臨床應(yīng)用。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)分組；
　　2.構(gòu)建大鼠宮腔粘連模型；
　　3.雌激素的劑量換算；
　　4.實(shí)驗(yàn)流程。
　　結(jié)果：
　　1.各組大鼠血清雌二醇(E2)濃度結(jié)果
　　(1) IUA造模前各組大鼠血清E2濃度比較
　　于IUA造模前剪尾采血測(cè)定每組大鼠血清E2濃度，結(jié)果顯示:比較8組大鼠血清E2濃度無

8、顯著性差異(F=0.752，P=0.643)，說明造模前各組大鼠內(nèi)分泌狀況相近。
　　(2)各組大鼠第二次采血血清E2濃度與第一次采血自身濃度比較
　　空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)對(duì)照組未予灌胃，24d后再次測(cè)定血清E2濃度與造模前比較無顯著性差異（P空白對(duì)照組=0.295，P實(shí)驗(yàn)對(duì)照組=0.952）;3個(gè)雌激素A組于造模當(dāng)天開始連續(xù)灌胃E2V24d后，測(cè)定各組大鼠血清E2濃度，與造模前自身的濃度比較均顯著升高(P＜0.05），各組P值

9、在P=0.002～0.000間，差異明顯;3個(gè)雌激素B組造模后第9d開始灌胃雌激素，同樣持續(xù)24d，抽血測(cè)定各組大鼠血清E2濃度，與造模前自身的濃度比較亦均顯著升高(P＜0.05)，各組P值在P=0.002～0.000間，差異亦明顯。
　　(3)各組大鼠第二次采血血清E2濃度組間分別比較
　　空白對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較，血清E2濃度無顯著性差異(P=0.240);6個(gè)雌激素組分別與2個(gè)對(duì)照組比較，血清E2濃度顯著升高，均有顯

10、著性差異(P＜0.05)，P值均為0.000。3個(gè)雌激素A組間分別比較，隨著灌胃E2V劑量的增加，血清E2濃度亦增加，結(jié)果具有顯著性差異(P＜0.05)，中雌A組高于低雌A組，高雌A組高于中雌A組及低雌A組（P值均為0.000）。3個(gè)雌激素B組間分別比較，隨著灌胃E2V劑量的增加，血清E2濃度亦增加，結(jié)果亦有顯著性差異(P＜0.05），中雌B組高于低雌B組，高雌B組高于中雌B組及低雌B組（P值均為0.000）。灌胃相同劑量E2V的各組大

11、鼠組間比較，低雌A組與低雌B組比較、中雌A組與中雌B組比較、高雌A組與高雌B組比較均無顯著性差異，P值分別為P=0.656、P=0.189、P=0.721。
　　(4)各組大鼠血清E2檢測(cè)結(jié)果總結(jié)
　　灌胃E2V后各組大鼠血清E2濃度的結(jié)果比較顯示，各組大鼠血清E2濃度與雌激素灌胃劑量呈正相關(guān)關(guān)系。
　　2.各組大鼠子宮內(nèi)膜纖維化面積比結(jié)果；
　　3.各組大鼠子宮內(nèi)膜腺體計(jì)數(shù)結(jié)果；
　　4.各組大鼠子宮內(nèi)膜

12、TGF-β1表達(dá)結(jié)果；
　　5.各組大鼠子宮內(nèi)膜MMP9表達(dá)結(jié)果；
　　6.各組大鼠子宮內(nèi)膜ER-α表達(dá)結(jié)果。
　　結(jié)論：
　　1.3個(gè)雌激素A組經(jīng)E2治療后纖維化面積比較實(shí)驗(yàn)對(duì)照組降低，腺體計(jì)數(shù)相對(duì)增多，考慮是否與在宮腔創(chuàng)傷初期IUA尚未完全形成時(shí)就開始服用雌激素，對(duì)大鼠IUA具有一定的預(yù)防作用有關(guān);3個(gè)雌激素B組纖維化面積和腺體計(jì)數(shù)均無明顯改善，可能與宮腔創(chuàng)傷后期、粘連程度加重、應(yīng)用雌激素的時(shí)間拖后，治療效果

13、欠佳有關(guān)，考慮在這個(gè)階段不能單一應(yīng)用雌激素治療IUA，如能結(jié)合TCRA、宮內(nèi)隔膜、干細(xì)胞等綜合性治療應(yīng)該會(huì)增加療效。
　　2.雌激素組中，中、高劑量組的TGF-β1表達(dá)水平較低劑量組降低，MMP9表達(dá)水平則升高，而中、高組間比較無差異，說明TCRA術(shù)后應(yīng)用中劑量雌激素是最低的有效劑量。
　　3.中、高劑量雌激素組的ER-α表達(dá)水平較低劑量雌激素組高，說明雌激素可以誘導(dǎo)ER-α的合成，而中、高劑量組間無差異，說明ER-α的合成