PDGF、TGF-β、TIMP-1在宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜組織及血清中的表達(dá)和意義.pdf_第1頁(yè)
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1、宮腔粘連(intrauterine adhesions,IUA)是指因?qū)m腔手術(shù)操作、放射、感染、結(jié)核等原因造成子宮頸管和(或)子宮腔壁相互粘連,臨床可表現(xiàn)為周期性腹痛、月經(jīng)減少或閉經(jīng)、繼發(fā)不孕、妊娠異常(流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎死宮中等)及胎盤異常(胎盤前置、胎盤粘連、胎盤植入等)。隨著人工流產(chǎn)及各種宮腔操作地逐漸頻繁,近年來(lái)IUA呈逐年上升的趨勢(shì),據(jù)報(bào)道大約1.7%的繼發(fā)性閉經(jīng)和40%的不孕患者均有不同程度的宮腔粘連。但是,其病因和發(fā)病機(jī)制尚未

2、完全清楚,成為當(dāng)前婦產(chǎn)科領(lǐng)域研究的難點(diǎn)和熱點(diǎn),因此國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了大量的臨床觀察與實(shí)驗(yàn)研究,就病因和發(fā)病機(jī)制提出了以下幾種學(xué)說(shuō):1)創(chuàng)傷;2)感染;3)神經(jīng)反射學(xué)說(shuō);4)纖維細(xì)胞增生活躍學(xué)說(shuō);5)低雌激素狀態(tài)。
   近年來(lái),以纖維細(xì)胞增生活躍學(xué)說(shuō)最受關(guān)注,成為研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。血小板源性生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factors,PDGF)是調(diào)控胚胎生長(zhǎng)發(fā)育、分化、細(xì)胞生長(zhǎng)以及其他包括惡性腫瘤

3、在內(nèi)的許多疾病的關(guān)鍵細(xì)胞因子,據(jù)報(bào)道,PDGF與多種器官纖維化的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforming growth factor beta, TGF-β)是強(qiáng)大的細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)劑,在纖維化過程中促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的合成并抑制其降解,在各個(gè)環(huán)節(jié)起作用,刺激各種ECM的合成和沉積,使基質(zhì)蛋白受體的數(shù)量增多的同時(shí)減少基質(zhì)降解酶以及增加降解酶抑制劑的合成,從而促進(jìn)纖維化的發(fā)生

4、?;|(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-l,TIMP-1)是一組基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)的主要抑制劑,幾乎不可逆地抑制MMPs的活性,阻止ECM的降解,從而促使ECM在細(xì)胞外堆積,促使纖維化的形成。
   目的:
   本研究采用免疫組織化學(xué)S-P法及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked imm

5、unosorbent assay, ELISA)法分別檢測(cè)宮腔粘連患者和非宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜組織中及血清中PDGF、TGF-β、TIMP-1的表達(dá),探討PDGF、TGF-β、TIMP-1在宮腔粘連發(fā)生發(fā)展中所起的作用,為宮腔粘連的治療和預(yù)防提供理論依據(jù)。
   材料與方法:
   1研究對(duì)象
   選擇2009年9月至2009年12月期間因IUA在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院住院行宮腔鏡下宮腔粘連分離術(shù)(transce

6、rvical resection of adhesions,TCRA)的患者60例作為研究組,其中輕-中度粘連組30例,年齡(29.57±3.53)歲,重度粘連組30例,年齡(29.82±3.85)歲,主訴為閉經(jīng)10例,月經(jīng)減少33例,繼發(fā)不孕17例;對(duì)照組選擇同期因子宮縱隔在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院住院行宮腔鏡下子宮縱隔電切術(shù)(transcervical resection of septum,TCRS)的患者30例,年齡(28.77±4

7、.60)歲。
   納入標(biāo)準(zhǔn):宮腔粘連組:官腔鏡檢查確診為IUA患者,且按照March分類法分為輕-中度粘連組、重度粘連組;子宮縱隔組;宮腔鏡檢查確診為子宮縱隔患者。
   排除標(biāo)準(zhǔn):年齡>40歲;體質(zhì)量>100kg;術(shù)前6個(gè)月內(nèi)服過激素類藥物或放置宮內(nèi)節(jié)育器;官腔鏡檢查證實(shí)有其它子宮內(nèi)疾?。ㄈ缂×?、息肉);有嚴(yán)重的其它系統(tǒng)疾?。δ苷系K、免疫系統(tǒng)疾病、嚴(yán)重心血管及肝、腎疾病、腫瘤);處在急性炎癥反應(yīng)階段;或有嚴(yán)重過

8、敏史及過敏體質(zhì)。所有研究對(duì)象均簽署了知情同意書。
   2標(biāo)本采集
   2.1子宮內(nèi)膜組織:分別取IUA患者及對(duì)照組子宮內(nèi)膜組織,子宮內(nèi)膜組織先放入10%的甲醛溶液中固定24h,之后石蠟包埋,每份標(biāo)本行HE染色后,光鏡下觀察組織學(xué)形態(tài),篩選組織標(biāo)本。
   2.2于無(wú)菌操作下分別采集IUA患者及對(duì)照組空腹外周靜脈血3mL,離心后取上清液,分組編號(hào)后,置-80℃冰箱凍存待成批測(cè)定。
   3實(shí)驗(yàn)方法

9、>   3.1子宮內(nèi)膜組織采用免疫組織化學(xué)S-P法,嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書方法染色,在顯微鏡下仔細(xì)觀察,子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞胞漿或者胞膜出現(xiàn)黃色-棕黃色-棕褐色顆粒沉著為陽(yáng)性細(xì)胞,PDGF、TGF-β、和TIMP-1主要定位于胞漿。全面觀察每張切片,隨機(jī)選取5個(gè)具有代表意義的高倍視野(×400),分別測(cè)定陽(yáng)性區(qū)百分比、積分光密度(OD)、陽(yáng)性區(qū)積分光密度,以陽(yáng)性區(qū)平均積分光密度值(IOD)作為本例切片的測(cè)定值。
   3.2血清采用

10、ELISA法,嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作,應(yīng)用酶標(biāo)儀在450nm處讀出各空的吸光度值(OD值),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得出3組血清中PDGF、TGF-β、和TIMP-1的濃度。
   4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
   應(yīng)用SPSS17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,各組計(jì)量資料均以(-x)±s表示。多組計(jì)量資料比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn),各個(gè)指標(biāo)之間的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析法。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
  

11、 結(jié)果:
   1 PDGF在子宮內(nèi)膜組織及血清中的表達(dá)
   PDGF在3組子宮內(nèi)膜組織中均可見表達(dá),主要集中在子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞的胞漿中,觀察組子宮內(nèi)膜組織中PDGF的表達(dá)高于對(duì)照組,其中重度粘連組子宮內(nèi)膜組織中PDGF的表達(dá)高于輕-中度粘連組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);
   PDGF在3組血清中均被檢測(cè)到,觀察組血清中PDGF的表達(dá)高于對(duì)照組,其中重度粘連組血清中PDGF的表達(dá)高于輕-中度粘連組

12、,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
   2 TGF-β在子宮內(nèi)膜組織及血清中的表達(dá)
   TGF-β在3組子宮內(nèi)膜組織中均可見表達(dá),主要集中在子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞的胞漿中,觀察組子宮內(nèi)膜組織中TGF-β的表達(dá)高于對(duì)照組,其中重度粘連組子宮內(nèi)膜組織中TGF-β的表達(dá)高于輕-中度粘連組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);
   TGF-β在3組血清中均被檢測(cè)到,觀察組血清中TGF-β的表達(dá)高于對(duì)照組,其中重度粘連組

13、血清中TGF-β的表達(dá)高于輕-中度粘連組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)
   3 TIMP-1在子宮內(nèi)膜組織及血清中的表達(dá)
   TIMP-1在3組子宮內(nèi)膜組織中均可見表達(dá),主要集中在子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞的胞漿中,觀察組子宮內(nèi)膜組織中TIMP-1的表達(dá)高于對(duì)照組,其中重度粘連組子宮內(nèi)膜組織中TIMP-1的表達(dá)高于輕-中度粘連組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);
   TIMP-1在3組血清中均被檢測(cè)到,觀察組

14、血清中TIMP-1的表達(dá)高于對(duì)照組,其中重度粘連組血清中TIMP-1的表達(dá)高于輕-中度粘連組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
   4 IUA患者子宮內(nèi)膜組織中PDGF、TGF-β、TIMP-1的相關(guān)性分析
   對(duì)觀察組子宮內(nèi)膜組織中PDGF與TIMP-1所表達(dá)的陽(yáng)性區(qū)平均積分光密度值做相關(guān)性分析,結(jié)果提示:兩者之間呈正相關(guān)(r=0.661,P<0.05)。對(duì)觀察組子宮內(nèi)膜組織中TGF-β與TIMP-1所表達(dá)的陽(yáng)性

15、區(qū)平均積分光密度值做相關(guān)性分析,結(jié)果提示:兩者之間呈正相關(guān)(r=0.661,P<0.05)。對(duì)觀察組子宮內(nèi)膜組織中TGF-β與TIMP-1所表達(dá)的陽(yáng)性區(qū)平均積分光密度值做相關(guān)性分析,結(jié)果提示:PDGF與TGF-β的表達(dá)呈相關(guān)(r=0.630,P<0.05)。
   結(jié)論:
   1 PDGF、TGF-β、TIMP-1可能在IUA的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用;
   2 IUA患者子宮內(nèi)膜組織及血清中PDGF、TGF-

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