SPIO-ShRNA探針體外轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞的最佳濃度及外加磁場對其轉(zhuǎn)染率的影響.pdf

1、第一部分SPIO-ShRNA雙功能分子探針體外轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞的最佳濃度研究
　　目的:不同質(zhì)量濃度的SPIO-ShRNA雙功能分子探針體外轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞，通過觀察細(xì)胞形態(tài)及EGFR表達(dá)，尋找分子探針最佳轉(zhuǎn)染濃度。
　　方法:將探針鐵濃度分別為5mg/L、15mg/L、30mg/L、45mg/L、75mg/L、100mg/L轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞后，采用熒光顯微鏡觀察探針表達(dá)情況，透射電鏡及普魯士藍(lán)染色直接觀察

2、細(xì)胞形態(tài)改變及細(xì)胞內(nèi)鐵顆粒的分布，應(yīng)用原子吸收光譜儀法測量細(xì)胞內(nèi)鐵含量，流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞凋亡情況，CCK-8檢測SKOV3細(xì)胞活性，western-blot法檢測SKOV3細(xì)胞內(nèi)EGFR蛋白的表達(dá)，細(xì)胞內(nèi)T2*WI信號強度的改變應(yīng)用MR掃描檢測。
　　結(jié)果：在一定鐵濃度范圍內(nèi)（5mg/L-30mg/L），細(xì)胞內(nèi)鐵含量隨探針濃度增加而逐漸增大，當(dāng)探針鐵濃度為45mg/L時，探針進(jìn)入SKOV3細(xì)胞量達(dá)到飽和，標(biāo)記率接近100％，細(xì)胞

3、活性下降，細(xì)胞存活率減低，細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)受到抑制(P均<0.01)，MR橫斷掃描圖像顯示T2*WI信號強度明顯降低(P<0.01)。
　　結(jié)論:SPIO-ShRNA分子探針轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞時，最優(yōu)轉(zhuǎn)染濃度為45mg/L，特異性抑制卵巢癌細(xì)胞的表達(dá)，并能被MR成像所檢測，初步證實具有診斷與特異性治療的雙重功效。
　　第二部分外加磁場對SPIO-ShRNA雙功能分子探針轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞的影響
　　目的：探討

4、外加磁場對SPIO-ShRNA雙功能分子探針轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞的影響。
　　方法:質(zhì)量濃度為45mg/L分子探針轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞時，并將SKOV3細(xì)胞分為3組:未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞組(空白對照組)， SPIO-ShRNA分子探針轉(zhuǎn)染的細(xì)胞組(陰性對照組)，培養(yǎng)皿底部外加磁場的 SPIO-ShRNA分子探針轉(zhuǎn)染的細(xì)胞組(實驗組)。流式細(xì)胞儀檢測卵巢癌SKOV3細(xì)胞轉(zhuǎn)染率，CCK-8觀察細(xì)胞增殖及活性，熒光定量PCR以及western-b

5、lot分別檢測表皮生長因子受體(EGFR) mRNA及蛋白表達(dá)量，磁共振（MR）掃描檢測各組細(xì)胞內(nèi)T2*WI信號強度變化。
　　結(jié)果:與陰性對照組比較，實驗組的細(xì)胞轉(zhuǎn)染率[(79.20±3.31)%]顯著增加(P=0.001);實驗組的細(xì)胞活性( P=0.011)、EGFR蛋白及mRNA表達(dá)量均明顯降低(P均<0.01);實驗組的MR圖像信號強度明顯降低( P=0.0004)。
　　結(jié)論:外加磁場可以誘導(dǎo) SPIO-ShRN