新型細(xì)胞因子CKLFSF8體外轉(zhuǎn)染對腫瘤細(xì)胞生物學(xué)功能的影響.pdf

1、目的 趨化因子是由免疫活性細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及一些腫瘤細(xì)胞合成分泌的一類小分子多肽，分子量約為8～10kD。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)50余種，屬細(xì)胞因子中的最大家族。它具有激活和趨化白細(xì)胞等作用，并在許多病理過程如炎癥發(fā)生、血管生成、腫瘤生長等過程起著非常重要的作用。 人趨化素樣因子超家族成員8(Chemokine-likefactorsuperfamily8，CKLFSF8)是新近發(fā)現(xiàn)的新型人類細(xì)胞因子，基因位于第3

2、號(hào)染色體(3p23)，cDNA全長為1185bp，其中第295—816位核苷酸編碼由173個(gè)氨基酸組成的CKLFSF8蛋白分子，該蛋白屬新型CC家族趨化因子一一趨化素樣因子1(CKLFl)超家族成員。該基因包括4個(gè)跨膜區(qū)和1個(gè)MARVEL(MAL-relatedproteinsforvesicletraffickingandmembranelinkdomain)結(jié)構(gòu)域，故又名為CMTMl-8(CKLF-likeMARVELtransme

3、mbrancedomaincontaining1-8)。 為了研究這種新型細(xì)胞因子的生物學(xué)功能及它在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，本實(shí)驗(yàn)擬選取兩種腫瘤細(xì)胞株一人胃腺癌細(xì)胞株BGC823和人白血病細(xì)胞株K562進(jìn)行研究，觀察細(xì)胞因子轉(zhuǎn)染前后腫瘤細(xì)胞生物學(xué)功能的變化，為抗腫瘤治療提供新的理論依據(jù)。 研究方法 分別提取人胃腺癌細(xì)胞株BGC823和人白血病細(xì)胞株K562的總RNA，利用RT-PCR方法檢測CKLFSF8基因在這兩

4、種腫瘤細(xì)胞株中的表達(dá)，然后用帶有綠色熒光蛋白的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染兩種腫瘤細(xì)胞檢測脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染率；用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將CKLFSF8基因轉(zhuǎn)染到腫瘤細(xì)胞造成細(xì)胞內(nèi)該基因的過表達(dá)，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長。分別取轉(zhuǎn)染前后的兩種細(xì)胞和培養(yǎng)上清進(jìn)行檢測。MTr法檢測細(xì)胞增殖，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測腫瘤細(xì)胞中EGFR表達(dá)情況。另外，對BGC823細(xì)胞株轉(zhuǎn)染前后的上清，用密度梯度離心法提取exosomes，WesternBlot和斑點(diǎn)免疫組化方法檢測exommes組

5、分的變化。分離人外周血淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，使用Millicell小室測定法檢測基因轉(zhuǎn)染前后腫瘤細(xì)胞趨化能力的變化。 結(jié)果 1．脂質(zhì)體介導(dǎo)的兩種腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染率分別為BGC823：75．5％、K562：65．5％。 2．轉(zhuǎn)染CKLFSF8基因?qū)GC823和K562的增殖均有抑制作用，與空白對照組和空質(zhì)粒組相比有顯著性差異(P<0．05)。CKLFSF8轉(zhuǎn)染前后BGC823和K562細(xì)胞EGFR陽性率對比有顯著性差異

6、(P<0．05)。 3．MHC—I、MHC一1I、CD54和LAMP-1分子在轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞內(nèi)及exosomes分子中表達(dá)沒有差別。 4．轉(zhuǎn)染后趨化指數(shù)大于3。 結(jié)論 LCKLFSF8對腫瘤細(xì)胞EGFR有抑制作用，對腫瘤細(xì)胞增殖也有抑制作用。提示該因子可能通過干擾EGFR而影響細(xì)胞增殖。 2．CKLFSF8的轉(zhuǎn)染對腫瘤細(xì)胞exosomes中的MHC—I、MHC—II、CD54和LAMPl分子的表達(dá)沒