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1、利用低分子量殼聚糖制備一種新型載基因納米微粒,作為基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng),表征其理化性質(zhì),檢測(cè)其生物學(xué)特性,并評(píng)估其體外轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞的性能。 方法以增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)質(zhì)粒及β-半乳糖酐酶(β-Galactosidase)質(zhì)粒作為報(bào)告基因,通過分子自組裝的方法制備載基因納米殼聚糖微粒。以透射電鏡(TEM)和原子力顯微鏡(AFM)觀察微粒的形態(tài),以激光粒徑分析儀測(cè)定其粒徑和表面的Zeta電位,行DNaseⅠ酶切保護(hù)實(shí)驗(yàn)研究殼聚糖對(duì)
2、質(zhì)粒DNA的保護(hù)作用,行MTT試驗(yàn)研究納米微粒對(duì)細(xì)胞的毒性作用,于體外進(jìn)行轉(zhuǎn)染試驗(yàn)觀察其對(duì)軟骨細(xì)胞的轉(zhuǎn)染活性。 結(jié)果殼聚糖可以和GFP質(zhì)粒相互作用形成帶有表面正電荷的納米微粒,能在很大程度上保護(hù)質(zhì)粒DNA不受DNaseⅠ的降解,對(duì)細(xì)胞的毒性小,轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞后基因能夠有效表達(dá)。 結(jié)論載基因低分子量殼聚糖納米微粒能夠有效地轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞,是一個(gè)很有潛力的納米局部傳輸系統(tǒng)(NanometerLocalDeliverySystem
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