DDX43促進(jìn)AML形成作用及相關(guān)基因OCT4在AML中表達(dá)研究.pdf

1、目的：
　　探索腫瘤/睪丸基因 DDX43在急性髓系白血病（AML）中的致病機(jī)制。分析DDX43及OCT4等在AML細(xì)胞中的相關(guān)性，研究AML患者中OCT4的表達(dá)狀況及臨床相關(guān)性。
　　方法：
　　1.應(yīng)用RQ-PCR技術(shù)檢測(cè)OCT4基因的表達(dá)水平，并使用SPSS20.0軟件對(duì)臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　2.構(gòu)建 DDX43過(guò)表達(dá)的HL60及 SHI-1穩(wěn)定細(xì)胞株，應(yīng)用 PQ-PCR以及Western Blot技

2、術(shù)從mRNA及蛋白水平檢測(cè)DDX43轉(zhuǎn)染AML細(xì)胞中的表達(dá)情況。
　　3.進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)、生存實(shí)驗(yàn)、周期實(shí)驗(yàn)、分化實(shí)驗(yàn)以及腫瘤球形成實(shí)驗(yàn)，觀察 DDX43轉(zhuǎn)染細(xì)胞的增殖、生存及自我更新能力；DDX43轉(zhuǎn)染細(xì)胞皮下接種裸鼠，記錄裸鼠的體重及腫瘤體積變化；裸鼠處死后，用 RQ-PCR及Western Blot技術(shù)檢測(cè)裸鼠腫瘤中DDX43的表達(dá)狀況。
　　4.運(yùn)用RQ-PCR技術(shù)檢測(cè)DDX43轉(zhuǎn)染細(xì)胞中OCT4、NANOG以及C

3、-MYC的表達(dá)水平，另采用Western Blot技術(shù)檢測(cè)DDX43轉(zhuǎn)染細(xì)胞中C-MYC的表達(dá)狀況。
　　結(jié)果：
　　1. OCT4在 AML中的研究結(jié)果：（1）與對(duì)照組相比，AML患者的OCT4基因表達(dá)水平明顯更高（P＜0.01）。OCT4的表達(dá)水平與患者的性別、年齡、外周血紅蛋白、血小板計(jì)數(shù)均無(wú)明顯的相關(guān)性（P＞0.05），但OCT4高表達(dá)組的患者比OCT4低表達(dá)組患者的白細(xì)胞計(jì)數(shù)要更高（P=0.001）。另外，M3患者

4、OCT4的高表達(dá)率要明顯低于其他類型的AML患者的OCT4高表達(dá)率（P=0.012）。（2） OCT4表達(dá)水平能夠有效鑒別AML患者和對(duì)照組，AUC為0.915（95％的可信區(qū)間為0.837～0.992；P＜0.001）。當(dāng)OCT4表達(dá)水平＜0.56時(shí)，其靈敏度和特異性分別為75.9％和81.2％。（3）高表達(dá)OCT4的患者和低表達(dá)OCT4的患者的完全緩解率不存在明顯的差異（54%比65%，P＞0.05）。在所有年齡低于70歲的患者中，

5、我們發(fā)現(xiàn)低OCT4表達(dá)患者比高OCT4表達(dá)的患者OS明顯延長(zhǎng)，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.048）。
　　2. DDX43在 AML中的致病機(jī)制的研究成果：（1） DDX43轉(zhuǎn)染細(xì)胞的DDX43表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組（P＜0.01）。（2）DDX43轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)速度均明顯快于對(duì)照組（P＜0.01）；DDX43轉(zhuǎn)染細(xì)胞的生存率均明顯高于對(duì)照組（P＜0.01）；在HL60細(xì)胞中，DDX43組的細(xì)胞能夠聚集形成較大腫瘤球，而對(duì)照組的細(xì)

6、胞大多散在，不能成球；DDX43的腫瘤球形成率明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。（3）DDX43轉(zhuǎn)染細(xì)胞的周期實(shí)驗(yàn)和分化實(shí)驗(yàn)的結(jié)果與對(duì)照組相比無(wú)明顯的差異（P＞0.05）。（4）DDX43組裸鼠的成瘤率明顯高于對(duì)照組；DDX43組的腫瘤體積大于對(duì)照組，兩者的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而且DDX43組的腫瘤的生長(zhǎng)速度顯著快于對(duì)照組，兩組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。DDX43組裸鼠腫瘤中DDX43含量明顯高于對(duì)照組，兩組的

7、差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（5）在HL60細(xì)胞中，DDX43轉(zhuǎn)染細(xì)胞中OCT4、NANOG、C-MYC的表達(dá)含量均顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），另外Western Blot也同樣證實(shí)DDX43組的C-MYC的蛋白水平明顯高于對(duì)照組。
　　結(jié)論：
　　1. OCT4在AML中表達(dá)水平明顯升高，且OCT4基因可以作為AML預(yù)后不良的重要標(biāo)志物；
　　2.構(gòu)建DDX43-HL60、Mock-HL60、DDX43-