靜脈高壓導致的剪應力改變在AIBP調(diào)控VEGF表達中的作用.pdf

1、研究背景:
　　硬腦膜動靜脈瘺(dural arteriovenous fistula，DAVF)是指硬腦膜及其附屬物（大腦鐮、小腦幕）上的動脈與腦皮層靜脈或靜脈竇間發(fā)生的異常血管短路，持續(xù)性的靜脈高壓會引發(fā)腦出血、腦水腫、靜脈性梗死、認知功能下降等神經(jīng)功能障礙。在臨床上，復雜性DAVF仍然難以通過外科治療得到完全治愈，明確該病發(fā)生發(fā)展的原因尤為關(guān)鍵。在對DAVF的病因?qū)W的研究中，發(fā)現(xiàn)靜脈高壓導致的血管新生起到關(guān)鍵作用，因此明確血

2、管新生在硬腦膜動靜脈瘺發(fā)病機制中的作用，成為控制該類疾病進展的重點。
　　實驗目的:
　　1.建立不同靜脈端壓力梯度的大鼠模型，探索靜脈端壓力改變對上矢狀竇剪應力的影響。
　　2.檢測AIBP-VEGF介導的血管新生通路中相關(guān)蛋白，在不同靜脈高壓大鼠模型硬腦膜中、在不同剪應力人臍靜脈內(nèi)皮細胞上清液中的表達情況，探索靜脈高壓造成的剪應力改變對AIBP調(diào)控血管新生的影響。
　　實驗方法:
　　1.第一部分:建立

3、不同靜脈壓力梯度的大鼠模型，將80只SD大鼠隨機分為4組，每組20只，其中A組20只大鼠行右側(cè)頸總動脈頸外靜脈吻合術(shù)+左側(cè)橫竇出口閉塞術(shù);B組20只大鼠行右側(cè)頸總動脈頸外靜脈吻合術(shù);C組20只大鼠行右側(cè)頸外靜脈結(jié)扎術(shù)及右側(cè)頸總動脈結(jié)扎術(shù);D組20只大鼠為假手術(shù)組，所有大鼠于術(shù)后行頂骨磨除術(shù)，暴露上矢狀竇，測量并計算3個月后上矢狀竇剪應力，處死大鼠后，取硬膜組織，檢測AIBP、VEGF的表達情況。
　　2.第二部分:按剪應力不同將人

4、臍靜脈內(nèi)皮細胞分為ABCDE四組，根據(jù)第一部分大鼠上矢狀竇剪應力結(jié)果，分別于10、5、2.5、1、0dyn/cm2剪應力環(huán)境下培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞24小時，取細胞上清行AIBP及VEGF的表達檢測，取細胞檢測細胞總膽固醇的含量，該部分實驗每組各重復進行三次。
　　實驗結(jié)果:
　　1.第一部分:A組大鼠上矢狀竇剪應力為5.32±0.31 dyn/cm2，B組大鼠上矢狀竇剪應力平均值2.39±0.03dyn/cm2，C組大鼠上矢

5、狀竇剪應力平均值0.97±0.01dyn/cm2，D組大鼠上矢狀竇剪應力平均值0.88±0.01 dyn/cm2，A、B組剪應力高于D組，有統(tǒng)計學意義，C、D兩組無統(tǒng)計學意義。Western blot及real-time PCR結(jié)果為A、B組大鼠硬腦膜中AIBP的表達明顯降低，VEGF表達明顯增高，與D組之間有統(tǒng)計學差異，C、D組無統(tǒng)計學意義。免疫組化結(jié)果可見AIBP在血管全層均有表達。
　　第二部分:A、B、C組高剪應力培養(yǎng)下的

6、臍靜脈內(nèi)皮細胞上清液中，AIBP表達量較E組降低，VEGF表達量較E組升高，P＜0.05;A、B、C組細胞總膽固醇含量較E組表達量升高，P＜0.05。D組細胞上清中檢測蛋白及細胞內(nèi)膽固醇總含量和E組相比，均無統(tǒng)計學意義。
　　實驗結(jié)論:
　　1.SD大鼠靜脈高壓模型建立成功3個月后，上矢狀竇的剪應力增高，硬膜血管內(nèi)皮中AIBP表達下降。
　　2.高剪應力條件下培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞AIBP的表達下調(diào)，細胞內(nèi)總膽固醇增加