細(xì)胞間通訊改變?cè)谏窠?jīng)外科中的應(yīng)用研究.pdf

1、第一部分低溫對(duì)大鼠膠質(zhì)細(xì)胞間縫隙連接通訊功能的影響 目的：探討低溫治療對(duì)大鼠膠質(zhì)細(xì)胞間縫隙連接通訊 (gap junctionalintercellular communication ，GJIC)功能的影響。 材料與方法：由大鼠神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)出神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞至致密單層，分別繼續(xù)在常溫、低溫、常溫輕度缺氧、低溫輕度缺氧培養(yǎng)，利用劃痕標(biāo)記染料示蹤技術(shù) (scrape-loading and dye transfer，SL

2、DT) 測(cè)定GJIC水平。利用PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)方法觀察溫度影響膠質(zhì)細(xì)胞間Cx43表達(dá)情況。 結(jié)果：常溫組(組①)染料5min擴(kuò)散距離為160.5±8.6 μm；低溫組(組②)GJIC 明顯受到抑制，擴(kuò)散距離為 126.2±10.4 μm；常溫輕度缺氧組(組③)擴(kuò)散距離為154.1±6.9μm；低溫輕度缺氧組(組④)擴(kuò)散距離為122.8±6.0μm。①與②、③與④統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異，①與③、②與④無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異。 膠質(zhì)

3、細(xì)胞30℃培養(yǎng)24h組：標(biāo)記Cx43 的羅丹明紅色熒光強(qiáng)度值81.7±2.6，單個(gè)熒光斑平均相對(duì)面積67.82±14.16；膠質(zhì)細(xì)胞37℃培養(yǎng)24h組：標(biāo)記Cx43的羅丹明紅色熒光強(qiáng)度 85.0±7.9，單個(gè)熒光斑平均相對(duì)面積 234.85±90.99。兩組熒光強(qiáng)度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)，但37℃培養(yǎng)24h組單個(gè)熒光斑平均相對(duì)面積大于30℃培養(yǎng)24h 組細(xì)胞(p<(0.01)，具有顯著差異。 Rea-time PCR結(jié)果：

4、37℃組Cx43 信號(hào)通路基因的表達(dá)量是30℃組的2.67倍。應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件 SPSS11.0 進(jìn)行方差分析，p<0.05 說(shuō)明兩組的Cx43信號(hào)通路基因的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：低溫降低神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞問(wèn)GJIC功能，可能是低溫治療顱腦創(chuàng)傷有效的作用機(jī)制之一。 第二部分腦蛋白水解液對(duì)大鼠膠質(zhì)細(xì)胞縫隙連接通訊的研究 目的：探討腦蛋白水解液對(duì)大鼠神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞間縫隙連接通訊(gapjunctional interc

5、ellular communication ，GJIC) 功能的影響。 材料和方法：由大鼠神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)出神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞至致密單層，分為給藥組①、對(duì)照組②、TPA陽(yáng)性對(duì)照組③繼續(xù)培養(yǎng)，利用劃痕標(biāo)記染料示蹤技術(shù)(scrape-loading and dye transfer，SLDT)，以熒光染料在細(xì)胞間的擴(kuò)散作為評(píng)價(jià)縫隙連接通訊的指標(biāo)，測(cè)定腦蛋白水解液對(duì)大鼠膠質(zhì)細(xì)胞縫隙連接通訊的影響；RT-PCR 法檢測(cè)給藥組和對(duì)照組細(xì)胞Cx

6、43mRNA 表達(dá)變化。造成輕度缺氧實(shí)驗(yàn)分組：④常氧對(duì)照組，⑤常氧給藥組，⑥輕度缺氧對(duì)照組，⑦輕度缺氧給藥組，⑧TPA陽(yáng)性對(duì)照組，檢測(cè)GJIC。 結(jié)果：腦蛋白水解液組染料5min擴(kuò)散距離為189.8±6.6 μm；對(duì)照組擴(kuò)散距離為154.7±6.0μm；組間統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異(p<0.05)；RT-PCR 檢測(cè)結(jié)果顯示給藥組細(xì)胞中Cx43mRNA表達(dá)高于對(duì)照組細(xì)胞(P<0.05)。組④染料5min擴(kuò)散距離為157.5±5.9 μ

7、m；組⑤擴(kuò)散距離為198.2±8.8μm；組⑥染判5min擴(kuò)散距離為153.8±7.6 μm；組⑦擴(kuò)散距離為195.9±12.9 μm。組④與組⑤、組⑥與組⑦統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異(p<0.01)；組④與組⑥、組⑤與組⑦無(wú)顯著性差異(p>0.05)。 結(jié)論：在本實(shí)驗(yàn)條件下，無(wú)論常氧還是輕度缺氧條件下，腦蛋白水解液可增強(qiáng)大鼠膠質(zhì)細(xì)胞縫隙連接通訊，增強(qiáng)膠質(zhì)細(xì)胞 Cx43mRNA 表達(dá)，提示腦蛋白水解液可能通過(guò)增強(qiáng) CJIC 對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞起

8、一定作用。 第三部分低溫抑制兔血管平滑肌細(xì)胞間縫隙連接通訊的研究 目的：探討凝血塊混合物對(duì)血管平滑肌縫隙連接通訊 (gap junctionalintercellular communication，GJIC) 功能的影響，闡明低溫治療具有抑制此種GJIC的作用。 資料和方法：培養(yǎng)兔血管平滑肌細(xì)胞至致密單層，分別加凝血塊混合物在常溫、低溫下培養(yǎng)組，以及無(wú)凝血塊混合物的常溫培養(yǎng)組，利用劃痕標(biāo)記染料示蹤技術(shù)(scra

9、pe-loading and dye transfer，SLDT)測(cè)定GJIC水平。 結(jié)果：加凝血塊混合物常溫組(組①) 染料5min 擴(kuò)散距離較無(wú)凝血塊混合物的常溫培養(yǎng)組(組②)遠(yuǎn)；加凝血塊混合物低溫組(組③)擴(kuò)散距離較組①染料5min擴(kuò)散距離明顯縮短。①與②、①與③統(tǒng)計(jì)學(xué)上有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P(0.01)。 結(jié)論：凝血塊混合物具有增強(qiáng)血管平滑肌細(xì)胞 GJIC 的功能；低溫具有降低此種WTIC功能的作用，可能是低溫治療蛛網(wǎng)