食品源鉛暴露對(duì)發(fā)育期海馬神經(jīng)元發(fā)育的影響及機(jī)理研究.pdf

1、食品安全與人類健康息息相關(guān)，而隨著環(huán)境問(wèn)題的突出，食品源性鉛暴露屢見(jiàn)不鮮。鉛是一種傳統(tǒng)的重金屬污染物，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)尤其是中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有毒性效應(yīng)。本研究組的前期工作結(jié)果表明，發(fā)育期鉛暴露會(huì)對(duì)大鼠大腦認(rèn)知功能造成一定的損傷，但是其內(nèi)在具體機(jī)制尚未完全明確。近來(lái)，有研究表明鉛暴露對(duì)神經(jīng)元發(fā)育過(guò)程有抑制作用，但對(duì)其內(nèi)在調(diào)節(jié)機(jī)制研究甚少。
　　目的:研究鉛暴露對(duì)Sprague-Dawley(SD)大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元增殖、分化的影響及相關(guān)信號(hào)通

2、路;研究鉛暴露調(diào)節(jié)神經(jīng)元成熟的詳細(xì)生物分子機(jī)制進(jìn)而推測(cè)其致神經(jīng)退行性疾病的潛在機(jī)制。
　　方法:1.SD大鼠按照雌雄1∶3配對(duì)后隨機(jī)分為正常對(duì)照組和鉛暴露組。正常對(duì)照組飲用蒸餾水，鉛暴露組飲用鉛水（250ppm醋酸鉛溶于蒸餾水，30mL/d）。實(shí)驗(yàn)鼠自胚胎期開(kāi)始接受鉛暴露，出生后至斷奶前（出生后21天）通過(guò)母乳間接接受鉛暴露，斷奶后通過(guò)飲用鉛水直接接受鉛暴露。對(duì)照組和鉛暴露組幼鼠均于出生后第19天至21天通過(guò)腹腔注射給予5-溴脫氧

3、尿嘧啶核苷(BrdU)，40mg/kg，每天一次，于第22天斷頭取材。免疫組織化學(xué)觀察海馬區(qū)新生神經(jīng)元數(shù)量，Westernblot檢測(cè)經(jīng)典Wnt通路相關(guān)蛋白表達(dá)量，Real-time Quantitative PCR(q-PCR)檢測(cè)經(jīng)典Wnt通路中mRNA的表達(dá)。
　　2.以離體培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元為實(shí)驗(yàn)材料，從RNA調(diào)控水平深入探究鉛暴露抑制神經(jīng)元發(fā)育的分子機(jī)制。取新生大鼠（出生后24小時(shí)內(nèi)，P0）原代海馬神經(jīng)元進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，體外

4、培養(yǎng)第3天開(kāi)始進(jìn)行醋酸鉛（5μM）處理，連續(xù)暴露11天，于第14天收樣。Western blot實(shí)驗(yàn)和q-PCR實(shí)驗(yàn)分別從蛋白水平和mRNA層面檢測(cè)Kmt2a(MLL1)的表達(dá)，同時(shí)q-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)具有招募功能的長(zhǎng)鏈非編碼RNA(LncRNA)的表達(dá)。
　　結(jié)果:1.鉛暴露顯著降低SD大鼠海馬區(qū)新生神經(jīng)元數(shù)目（BrdU標(biāo)記）。
　　2.鉛暴露顯著升高磷酸化β-catenin蛋白水平，降低磷酸化GSK-3β蛋白水平，而對(duì)GS

5、K-3β和β-catenin總體蛋白水平?jīng)]有產(chǎn)生顯著影響。此外GSK-3β在mRNA水平上顯著上升。
　　3.鉛暴露顯著抑制MLL1蛋白水平和mRNA水平的表達(dá)。
　　4.鉛暴露可影響H3K4me3在染色質(zhì)中分布，并且這種改變可能是通過(guò)影響具有招募功能的LncRNA表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。
　　結(jié)論:本研究從經(jīng)典Wnt信號(hào)通路和靶分子H3K4me3兩個(gè)分子機(jī)制作為切入點(diǎn)共同探究發(fā)育期鉛暴露對(duì)大腦新生神經(jīng)元的增殖、分化以及成熟兩個(gè)方