鉛對(duì)發(fā)育期大鼠海馬細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)和XIAP、Smac基因表達(dá)的影響.pdf

1、背景:鉛是環(huán)境中一種常見(jiàn)的污染物,中樞神經(jīng)系統(tǒng)是其毒性作用的主要靶器官,發(fā)育中的神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)鉛尤為敏感[1]。據(jù)報(bào)道鉛的神經(jīng)毒性與細(xì)胞凋亡有關(guān)[2],但對(duì)其詳細(xì)機(jī)制仍未完全清楚。細(xì)胞凋亡受到許多因素的調(diào)控。近年來(lái)許多研究發(fā)現(xiàn),X連鎖凋亡抑制蛋白(X Chromosome Linked Inhibitor of Apoptosis Protein, XIAP)在抑制細(xì)胞凋亡的過(guò)程中起著重要作用。它是迄今為止最強(qiáng)大的半胱氨酸天門(mén)冬氨酸蛋白酶(

2、caspase)的內(nèi)源性抑制劑。而線粒體結(jié)合蛋白Smac(Smac/DIABLO,second mitochondria-derived activator of caspase/direct inhibitor-of-apoptosis protein-binding protein with low pI)可以阻止XIAP對(duì)Caspase的抑制且激活Caspase酶原,并增強(qiáng)成熟Caspase酶的活性,是近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究和報(bào)道較

3、多的促凋亡基因之一[3]。
　　目的:為了進(jìn)一步揭示鉛的神經(jīng)毒作用機(jī)制,為預(yù)防和治療鉛中毒提供科學(xué)依據(jù),研究鉛對(duì)發(fā)育期大鼠海馬細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)及相關(guān)基因的作用。用不同劑量醋酸鉛溶液處理發(fā)育期大鼠,觀察其細(xì)胞凋亡的發(fā)生情況及凋亡相關(guān)基因XIAP和Smac mRNA的表達(dá)。
　　方法:48只健康的雄性一月齡SD大鼠,隨機(jī)分為對(duì)照、低鉛、中鉛、高鉛劑量組,分別給予雙蒸水、2mg/Kg、20mg/Kg、200mg/Kg的醋酸鉛溶液灌胃

4、六周。每組12只大鼠再隨機(jī)分成A、B兩亞組。A亞組大鼠斷頭處死,取頸血后以石墨爐原子吸收法測(cè)血鉛;剝離海馬組織提取總RNA后進(jìn)行XIAP和Smac mRNA的RT-PCR反應(yīng),反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳并掃描成像后利用凝膠自動(dòng)分析成像軟件Quantity One4.4.0進(jìn)行灰度值分析,以β- actin為內(nèi)對(duì)照,求出XIAP和Smac mRNA量的相對(duì)值。B亞組大鼠經(jīng)灌注后取右半腦,常規(guī)固定、脫水和石蠟包埋后制成石蠟切片。用末端脫氧核

5、糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(terminal-dexoynucleotidyl transferase mediated-UTP nick end labeling,TUNEL法)檢測(cè)大鼠腦組織細(xì)胞凋亡的發(fā)生情況。
　　結(jié)果:大鼠血液中的鉛濃度隨染鉛程度的加深而升高。各劑量組大鼠海馬組織凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯增加,顯著高于對(duì)照組,并且隨染鉛程度的上升而增加;大鼠海馬組織的XIAP基因表達(dá)有下降趨勢(shì),高鉛劑量組顯著低于對(duì)照組。相關(guān)分