幼鼠七氟醚暴露抑制發(fā)育期海馬錐體神經(jīng)元Ca2+通道活性.pdf

1、研究目的:
　　七氟醚(Sevoflurane，Sevo)是一種吸入性全身麻醉藥，嬰幼兒期七氟醚暴露對發(fā)育期學(xué)習(xí)記憶的影響是麻醉臨床關(guān)注的熱點。電壓門控性鈣離子通道(Voltage-gated Ca2+channels，VGCCs)參與調(diào)節(jié)神經(jīng)元興奮性，對大腦發(fā)育起至關(guān)重要作用。本論文應(yīng)用膜片鉗技術(shù)檢測正常大鼠大腦快速發(fā)育期（1-5周）內(nèi)海馬CA1區(qū)VGCCs特性的變化，研究大鼠海馬VGCCs的發(fā)育關(guān)鍵期;研究1周齡大鼠七氟醚暴露

2、對發(fā)育期海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元VGCCs活性的影響，探索七氟醚對大鼠快速發(fā)育期（1-5周）海馬VGCCs活性的抑制作用，探討不同濃度七氟醚對VGCCs的不同程度的抑制作用，為七氟醚的臨床應(yīng)用提供實驗研究支持。
　　研究方法:
　　1.實驗動物分組
　　1周齡SD大鼠45只隨機分為正常組（Control，Con）、2.1％七氟醚組(2.1％Sevoflurane，Sevo1)和3％七氟醚組(3％ Sevoflurane，

3、Sevo2)。每組均按照出生后的周齡分為5組:1周齡(1w)組、2周齡(2w)組、3周齡(3w)組、4周齡(4w)組、5周齡(5w)組。
　　2.七氟醚暴露模型鼠的制備
　　將1周齡Sprague-Dawley(SD)大鼠放置于自制的麻醉誘導(dǎo)箱內(nèi)進行氣體暴露，正常組大鼠自主吸入100％氧氣，2.1％七氟醚組和3％七氟醚組分別吸入濃度為2.1％和3％的七氟醚，每組均持續(xù)暴露6小時。
　　3.大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元的急

4、性分離
　　將大鼠快速斷頭取腦，分離出海馬，手工切成400-600 um的腦片置于32℃人工腦脊液中孵育1小時，然后分離出海馬腦片CA1區(qū)，將其酶解20-40分鐘，吹打組織片制成細胞懸液，取其上清液貼壁30分鐘。
　　4.數(shù)據(jù)記錄及統(tǒng)計分析
　　采用膜片鉗全細胞記錄技術(shù)，分別記錄以上5個周齡組大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元的VGCCs電流，利用軟件Clampfit10.3、Origin6.0和SPSS18進行數(shù)據(jù)處理（電流

5、密度、穩(wěn)態(tài)激活特性、穩(wěn)態(tài)失活特性）和統(tǒng)計學(xué)分析。
　　研究結(jié)果;
　　1.正常組大鼠快速發(fā)育期海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元VGCCs特性
　　1-5w正常組大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元VGCCs最大電流密度(pA/pF)分別為:Con1w，9.56±0.63;Con2w，10.84±0.24; Con3w，14.08土0.93; Con4w，15.00±0.84; Con5w，17.22±0.59。隨著鼠齡的增加，VGCCs的

6、最大電流密度逐步增大。其中，Con2w與Con3w組之間VGCCs最大電流密度的增幅最大，為(29.89±0.58)％(P＜0.01)。
　　隨著鼠齡的增加，VGCCs穩(wěn)態(tài)激活曲線向超極化方向移動，Con1w與Con2w組之間VGCCs的半數(shù)激活電壓(mV)逐漸減小，分別為-7.89±0.48和-10.84±0.44(P＜0.05)，Con2w與Con3w組、Con3w與Con4w組、Con4w與Con5w組之間半數(shù)激活電壓無顯著

7、性變化(P＞0.05);1-5w大鼠海馬VGCCs的穩(wěn)態(tài)激活斜率因子(k)無顯著性變化（P＞0.05）。
　　隨著鼠齡的增加，VGCCs穩(wěn)態(tài)失活曲線向超極化方向移動，大鼠海馬VGCCs的半數(shù)失活電壓(mV)和斜率因子(k)均無顯著性變化（P＞0.05）。
　　2.七氟醚組大鼠快速發(fā)育期海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元VGCCs特性
　　與Con組相比，Sevo11w、Sevo21w組與Sevo12w、Sevo22w組電流密度均有

8、所降低(P＜0.01)，且Sevo12w與Sevo22w組最大電流密度均低于Con1w組。1w時，Sevo1和Sevo2組最大電流密度的降低幅度分別為28％(P＜0.01)，62％(P＜0.01);2w時，Sevo1和Sevo2組最大電流密度的降低幅度分別為22％(P＜0.01)，43％(P＜0.01)。在3w、4w與5w時沒有顯著性差異(P＞0.05)。
　　Sevo21w與Sevo22w組VGCCs穩(wěn)態(tài)激活曲線向去極化方向移動

9、，半數(shù)激活電壓和斜率因子增大(P＜0.01);Sevo23w、Sevo24w與Sevo25w組沒有顯著性差異（P＞0.05）。Sevo1組VGCCs穩(wěn)態(tài)激活曲線沒有顯著性變化(P＞0.05)。
　　Sevo21w、Sevo22w與Sevo23w組VGCCs穩(wěn)態(tài)失活曲線向去極化方向移動，半數(shù)失活電壓和斜率因子增大(P＜0.01);Sevo24w與Sevo25w組半數(shù)失活電壓和斜率因子沒有顯著性變化（P＞0.05）。Sevo11w與S

10、evo12w組VGCCs穩(wěn)態(tài)失活曲線向去極化方向移動，半數(shù)失活電壓增大(P＜0.01)，斜率因子沒有顯著性差異(P＞0.05); Sevo13w、Sevo14w與Sevo15w組半數(shù)失活電壓和斜率因子均沒有顯著性變化(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.正常1-5w大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元VGCCs電流密度隨著鼠齡的增加而逐步增大，尤其是在2w到3w之間增長最快，大鼠出生后2w到3w是VGCCs的發(fā)育關(guān)鍵期。
　　2.

11、2.1％和3％七氟醚均明顯降低1-2w大鼠海馬VGCCs電流密度。3％七氟醚抑制1-2w大鼠海馬VGCCs的穩(wěn)態(tài)激活和1-3w大鼠海馬VGCCs的穩(wěn)態(tài)失活，而2.1％七氟醚對1-2w大鼠海馬VGCCs的穩(wěn)態(tài)失活具有抑制作用，對穩(wěn)態(tài)激活特性沒有顯著性影響。七氟醚持續(xù)抑制大鼠快速發(fā)育期海馬神經(jīng)元VGCCs的活性，其抑制作用隨周齡的增加而降低，在4-5w時恢復(fù)到正常發(fā)育水平。
　　3.2.1％七氟醚對VGCCs電流密度、穩(wěn)態(tài)失活的抑制作