重組輪狀病毒多表位在煙草中的表達.pdf

1、本實驗用PCR的方法得到RVVP4的抗原表位核苷酸序列，并人工合成了RVVP7的三個抗原表位核苷酸序列、通用輔助性T淋巴細(xì)胞表位(PADRE)核苷酸序列和編碼破傷風(fēng)毒素上T細(xì)胞激活位點的核苷酸序列，各表位間以非極性的甘氨酸和脯氨酸分隔以保持相對獨立性，使用搭橋法PCR(overlapextensionPCR)、酶切、連接等基因工程的方法將各個表位片段串聯(lián)拼接在一起，組合成重組輪狀病毒多表位(RE)，將其轉(zhuǎn)入原核載體質(zhì)粒pTHioHisB

2、，構(gòu)建了重組表達質(zhì)粒pTH-RE并在大腸桿菌BL21中表達，表達蛋白經(jīng)SDS—PAGE分析，相對分子量與預(yù)期結(jié)果相符，大小約44.7KDa；表達蛋白經(jīng)輪狀病毒ELISA快速檢測試劑盒檢測有免疫原性。將重組輪狀病毒多表位插入高效植物表達載體pE1802，構(gòu)建了重組植物表達質(zhì)粒pE-RE。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草，經(jīng)卡那霉素(Kan)多重篩選，獲得抗性植株，對抗性植株提取DNA進行PCR分析，90％抗性植株均呈陽性。選取生長良好的PCR檢測