胃腸安丸抗輪狀病毒的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討胃腸安丸體內(nèi)外抗輪狀病毒(Rotavirus，RV)SA11株的效果。
　　 方法：
　　 1胃腸安丸體外抑制RV效果的研究：
　　 1.1采用組織細(xì)胞培養(yǎng)法，觀察細(xì)胞病變效應(yīng)(Cytopathic effect，CPE)和噻唑藍(lán)比色分析法(MTT)檢測胃腸安丸在恒源猴腎細(xì)胞(MA104)中對RV的作用。并通過不同的給藥方式評價(jià)胃腸安丸對RV SA11株的預(yù)防作用、治療作用和直接滅活作用。
　　

2、 1.2運(yùn)用血清藥理學(xué)方法制備胃腸安丸含藥血清，通過觀察CPE及MTT方法檢測大鼠服藥后不同時(shí)間的含藥血清抑制RV的效果。
　　 2胃腸安丸體內(nèi)抑制RV效果的研究：
　　 觀察3日齡乳鼠60只，將同一母鼠喂養(yǎng)的乳鼠分為不同的組，以排除母乳喂養(yǎng)可能造成的干擾。將60只乳鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，即正常對照組(A組)、病毒對照組(B組)、病毒唑治療對照組(C組，即10倍臨床常用劑量)、胃腸安丸高劑量組(D組，即30倍臨床常

3、用劑量)、胃腸安丸中劑量組(E組，即20倍臨床常用劑量)、胃腸安丸低劑量組(F組，即10倍臨床常用劑量)。除A組用50μl MA104細(xì)胞培養(yǎng)液灌胃而不用病毒灌胃外，其余5組均用胰酶活化、滴度(TCID50)為10-6.3的病毒懸液50μl灌胃，接種途徑為自然吮吸，連續(xù)2天。感染病毒1 h后，A、B組給予蒸餾水，治療組分別給予胃腸安丸、病毒唑口服治療，20μl/只，連續(xù)4天，各組均不給予其他藥物治療，均給予普通飼料及飲水。
　　

4、 觀察各組乳鼠的臨床反應(yīng)、生長發(fā)育和排毒情況。RV攻擊后第4天隨機(jī)處死各組乳鼠5只，留取血液和小腸標(biāo)本，另外5只乳鼠繼續(xù)觀察臨床癥狀。病毒感染前后檢測大便輪狀病毒抗原；心臟取血測定細(xì)胞因子TNF-α、IFN-γ；取脾臟做T、B淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)；感染后第4天取小腸做HE染色觀察小腸組織病理改變；采用免疫組化染色觀察乳鼠空腸RV抗原分布；采用Tunel細(xì)胞凋亡原位檢測RV是否引起小腸細(xì)胞凋亡；CPE法滴定乳鼠小腸中RV滴度。
　　

5、結(jié)果：
　　 1胃腸安丸體外抑制RV效果
　　 1.1胃腸安丸對MA104細(xì)胞有預(yù)防作用、治療作用、直接滅活作用。對RV的半數(shù)抑制濃度(50％inhibiting concentration，IC50)分別為0.261 mg/ml，0.269mg/ml，0.114 mg/ml。治療指數(shù)(Therapeutic index，TI)分別是4.79，4.67，10.96。
　　 1.2含胃腸安丸血清稀釋度為1:16且在

6、灌胃后45 min～65 min，含藥血清對RV呈現(xiàn)較好的抑制作用。
　　 2胃腸安丸體內(nèi)抑制RV效果：
　　 胃腸安丸中劑量組中TNF-α及IFN-γ值與病毒對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；胃腸安丸高劑量組的T、B淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)與病毒對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HE染色顯示胃腸安丸可減輕乳鼠小腸的病理變化；免疫組化顯示胃腸安丸可有效抑制乳鼠小腸的RV SA11抗原的表達(dá)；CPE滴定乳鼠

7、小腸中RV滴度顯示胃腸安丸可降低小腸中RV滴度的作用。
　　 結(jié)論：
　　 1胃腸安丸在體外具有抑制RV SA11株在MA104細(xì)胞病變發(fā)生的作用。
　　 2胃腸安丸在體內(nèi)可以減輕RV引起的腸道病理性變化，有效抑制了乳鼠小腸的RV SA11抗原的表達(dá)，降低小腸中RV滴度的作用。
　　 結(jié)果顯示，胃腸安丸在體內(nèi)外均有抑制RV的作用，和減輕RV感染后的癥狀，為臨床應(yīng)用胃腸安丸治療RV腹瀉提供了理論的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。