輪狀病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NSP3的重組表達(dá)及免疫學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、輪狀病毒屬于呼腸病毒科，是世界范圍內(nèi)引起嬰幼兒嚴(yán)重腹瀉的主要病原體，每年全世界死于輪狀病毒感染的兒童約達(dá)611 000。輪狀病毒具有三層衣殼，其基因組由11個(gè)分節(jié)段的雙鏈RNA組成，編碼6個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白和6個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白。根據(jù)交叉反應(yīng)性抗原的不同，輪狀病毒分為A-G 7個(gè)組，其中只有A、B、C三個(gè)組可以感染人類，而引起嬰幼兒腹瀉的主要為A組，該組是最常見(jiàn)也是最為重要的。A組輪狀病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NSP3為分子量36 kDa的同二聚體，其N端可以結(jié)

2、合輪狀病毒mRNA3’末端的組特異性四核苷酸共有序列，C端與poly(A)結(jié)合蛋白競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合真核翻譯起始因子elF4G。NSP3能夠關(guān)閉宿主細(xì)胞mRNA的翻譯，并且可能在輪狀病毒基因組復(fù)制和病毒形態(tài)發(fā)生中起重要作用。 本研究克隆了A組人輪狀病毒TB-Chen株NSP3編碼基因，應(yīng)用質(zhì)粒pETI_，作為表達(dá)載體構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pET-NSP3，并在大腸桿菌BL21(DE3)中高效表達(dá)了重組蛋白NSP3，目的蛋白表達(dá)量占菌體總蛋白量

3、的28.6％。采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離回收的方法有效地純化了目的蛋白，并制備了該重組蛋白的免疫豚鼠血清抗體，Western blot分析顯示該血清抗體能與重組蛋白NSP3發(fā)生特異性免疫反應(yīng)。免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示在輪狀病毒感染的MA104細(xì)胞中NSP3分布在整個(gè)細(xì)胞質(zhì)中。NSP3在細(xì)胞質(zhì)中分布形式不一致：有的分布彌散、均勻；有的既有彌散分布，又呈現(xiàn)顆粒狀，并且這些顆粒更多地出現(xiàn)在細(xì)胞核周圍。這些結(jié)果為進(jìn)一步研究TB-Chen株輪狀病