新型乙醇誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)的初步研究及植物雙元表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、學(xué)校代碼：10135論文分類號(hào)：學(xué)號(hào)：20104016014研究生類別：全日制幽韶缸貉犬乎碩士專業(yè)學(xué)位論文新型乙醇誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)的初步研究及植物雙元表達(dá)載體的構(gòu)建Apreliminarystudyofthenewethanolinducibleexpressionsystemandtheconstructionofplantbinaryexpressionvector學(xué)科門類：一級(jí)學(xué)科：學(xué)科、專業(yè)：研究方向：申請(qǐng)人姓名：指導(dǎo)教師姓名：理學(xué)

2、生物學(xué)植物學(xué)植物生態(tài)學(xué)王慧徐杰姚磊二。一三年四月二十日內(nèi)蒙古帥范大學(xué)碩士學(xué)位論文中文捅要來源于構(gòu)巢曲霉組成的乙醇誘導(dǎo)系統(tǒng)由兩部分組成，分別為AIcR蛋白和一個(gè)誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，乙醇存在條件下，可改變AIcR蛋白構(gòu)象，使得原本沒有活性的蛋白激活，激活后蛋白會(huì)識(shí)別誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，女HalcA啟動(dòng)子上AleR特異性識(shí)別位點(diǎn)，激活啟動(dòng)子進(jìn)一步使得目的基因表達(dá)。乙醇誘導(dǎo)系統(tǒng)可在時(shí)間和空間上控制目的基因的表達(dá)，利用乙醇誘導(dǎo)系統(tǒng)AlcR／alcA進(jìn)行標(biāo)記基

3、因的刪除驗(yàn)證試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，未誘導(dǎo)條件下乙醇誘導(dǎo)系統(tǒng)AlcR／alcA在原核生物中為組成型表達(dá)。為了研發(fā)新型乙醇誘導(dǎo)系統(tǒng)，使其在原核生物及真核生物中均為誘導(dǎo)型表達(dá)。對(duì)同alcA一樣受至t]AIcR調(diào)控的啟動(dòng)子進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)中以構(gòu)巢曲霉基因組為模板，克隆了alcS、alcM、alcP、alcU、alcR、alcA、aldA自然啟動(dòng)子并測(cè)序正確，構(gòu)建載體pUCl9alcX(aldA)一Cre，利用Cre蛋白可識(shí)別兩個(gè)同lh]loxp位點(diǎn)并發(fā)生刪

4、除或重組的Cre／loxp位點(diǎn)特異性重組系統(tǒng)，在原核生物大腸桿菌Ecob中驗(yàn)證在未誘導(dǎo)條件下，自然啟動(dòng)子的啟動(dòng)Cre蛋白表達(dá)而刪除或重組兩個(gè)同向loxp位點(diǎn)之間抗性基因情況。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：(1)自然啟動(dòng)子alcS在原核生物中，未誘導(dǎo)條件下啟動(dòng)了Cre表達(dá)，并刪除TpYBAIOOqb兩個(gè)同loxp位點(diǎn)之間的抗性基因片段；(2)自然啟動(dòng)子atcA、alcU和alcR在原核生物中，未誘導(dǎo)條件下啟動(dòng)Cre表達(dá)，并_[tpYBAl00d兩個(gè)同I

5、句loxp位點(diǎn)之間抗性片段發(fā)生重組現(xiàn)象；(3)自然啟動(dòng)子alcP、alcS與aldA在原核生物中，未誘導(dǎo)條件下沒有啟動(dòng)Cre表達(dá)，pYBAl00中兩個(gè)同loxp位點(diǎn)之間的抗性基因沒有發(fā)生刪除及重組現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在原核生物中未誘導(dǎo)條件下，自然啟動(dòng)子alcP、alcS與aldA沒有啟動(dòng)Cre表達(dá)而發(fā)生刪除或重組現(xiàn)象，為無泄漏啟動(dòng)子；自然啟動(dòng)子alcA、alcU、alcS和alcR啟動(dòng)了Cre表達(dá)而使得兩個(gè)同lfi]loxp位點(diǎn)之間片段