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文檔簡介
1、該工作利用DNA重組技術(shù)構(gòu)建了三個(gè)植物表達(dá)載體:pCAMBIA1300-AtNHX1-als、pCAMBIA1300-betA-als和pROK2-asPLDγ-als.基因AtNHX1編碼擬南芥液泡膜上的Na<'+>/H<'+>反向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白.在鹽脅迫條件下,Na<'+>/H<'+>反向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白被激活,將Na<'+>泵入液泡儲(chǔ)存起來以消除離子毒害,從而提高植物耐鹽性.betA基因來自大腸桿菌,編碼膽堿脫氫酶(CDH),它能夠催化膽堿形成
2、甜菜堿.轉(zhuǎn)betA基因的植物積累甘氨酸甜菜堿的能力增強(qiáng),因而抗逆性得到提高.asPLDγ基因來自蓖麻,是PLDγ的反義基因,PLDγ編碼磷脂酶D,該酶活性降低可減輕細(xì)胞遭受脅迫后的膜結(jié)構(gòu)損傷和正常代謝功能的下降.乙酰乳酸合成酶(acetolactate synthase,ALS)是分支氨基酸合成中的關(guān)鍵酶,也是磺酰脲類除草劑的作用位點(diǎn).擬南芥(Arabidopsis thaliana)的als基因中特定堿基發(fā)生突變,使之對(duì)該類除草劑表現(xiàn)
3、出抗性.采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草葉盤,獲得了雙抗(抗除草劑、耐鹽)轉(zhuǎn)基因植株.PCR檢測(cè)結(jié)果表明,同一載體上的兩個(gè)基因轉(zhuǎn)入到大部分轉(zhuǎn)化植株中.pCAMBIA1300-AtNHX1-als、pCAMBIA1300-betA-als轉(zhuǎn)化的煙草再生植株耐鹽性和除草劑抗性均有顯著提高.與對(duì)照植株相比,耐鹽性提高了1.0﹪NaCl濃度,除草劑抗性提高了約1000倍.Southern雜交結(jié)果表明,AtNHX1基因已經(jīng)整合到煙草的染色體上.對(duì)轉(zhuǎn)AtN
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