候選腫瘤抑制基因dSSB1的篩選及初步功能探究.pdf

1、單鏈DNA結合蛋白家族SSBs對于基因組的穩(wěn)定性具有重要作用，參與了DNA復制、DNA損傷檢測與修復、DNA重組和端粒維持等機制。已經發(fā)現的DNA單鏈結合蛋白有復制蛋白A(RPA)、hSSB1、hSSB2等。其中hSSB1是最近發(fā)現的一種DNA單鏈結合蛋白，DNA雙鏈斷裂(DSBs)會使hSSB1被ATM磷酸化，同時hSSB1穩(wěn)定性增強。在DNA損傷的誘導下，hSSB1在細胞核中積累，從而影響DNA損傷反應中的終末點(endpoints

2、)，激活細胞周期檢查點并參與DNA損傷修復。最近有報道稱hSSB1可以與p53和p21分別結合，同時可以防止p53和p21通過泛素化途徑降解。此外，hSSB1通過對p53和p21的正向調節(jié)作用，參與了DNA損傷修復反應中的G2/M期檢查點。由于很多人類腫瘤的發(fā)生與p53和p21功能異常相關，因此對于hSSB1功能的研究具有重要的意義。dSSB1是hSSB1在果蠅中的同源蛋白，但尚無關于前者功能的相關報道。
　　 本文介紹了通過遺

3、傳學技術和細胞學技術對dSSB1功能進行的初步研究，證明了dSSB1是候選腫瘤抑制基因。通過“p-element非精確剪切”轉座重組，得到了純合致死的dSSB1突變體果蠅（dSSB1基因敲除果蠅），并通過rescue實驗證明是由于基因dSSB1的缺失導致了突變體果蠅的純合致死。借助Frt-flp系統，在果蠅體內誘導了純合的突變克?。╠SSB1-/dSSB1-），發(fā)現dSSB1純合突變組織較周圍組織具有生長優(yōu)勢，表現為突起和增生，并且有部

4、分組織壞死。對dSSB1突變體果蠅的表型驗證表明，dSSB1符合腫瘤抑制基因的基本特征。此外，通過顯微注射得到了dSSB1過表達和RNAi轉基因果蠅，并發(fā)現基因dSSB1與Hpo信號通路組分Yki和ft具有遺傳學關系。同時，在果蠅S2細胞中表達了HA-dSSB1、Flag-dp53（果蠅p53同源物標簽蛋白）和Flag-Dap（果蠅p21同源物標簽蛋白），并純化了GST-dSSB1融合蛋白，為研究dSSB1與dp53和Dap的相互作用關