腫瘤候選基因PRR11原核、真核表達載體構建、細胞定位及功能的初步研究.pdf

1、PRR11是一個富含脯氨酸的蛋白，共編碼360個氨基酸，基因位于染色體17q22，此區(qū)域是在肺癌等各種腫瘤上的一個高發(fā)的基因擴增區(qū)，通過前期的研究表明，此基因可能是一種新的腫瘤相關基因，對新的腫瘤相關基因的研究不僅有助于進一步闡明腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機制，而且也可能作為有效的生物靶點用于尋找新的腫瘤診斷方法以及開發(fā)新的抗腫瘤藥物。本課題通過構建PRR11真核、原核表達載體，通過過表達觀察對細胞周期的影響，并觀察蛋白細胞定位，對深入研究PRR

2、11功能奠定基礎。 第一部分PRR11基因原核表達載體的構建、表達及鑒定 目的：構建人PRR11基因的原核表達載體，表達及鑒定。 方法：以Hela細胞cDNA為模板，PCR擴增PRR11基因，克隆入原核表達載體PET-28a中，測序正確后，再把構建好的重組原核表達載體PET-28a-PRR11轉(zhuǎn)化到BL21中，經(jīng)IPTG誘導蛋白表達，提取細胞蛋白并用Western blot分析目的蛋白的表達情況。 結果：

3、成功擴增了PRR11基因，雙酶切鑒定證實目的基因成功克隆到原核表達載體PET-28a中，測序結果序列完全正確，表達載體構建成功。轉(zhuǎn)化到BL21細胞中經(jīng)IPTG誘導目的蛋白成功表達，Western blot分析也證實了目的蛋白表達成功。 結論：成功構建了PRR11基因的原核表達載體，為深入研究PRR11基因功能奠定基礎。 第二部分PRR11基因真核表達載體的構建、表達及鑒定。 目的：構建人PRR11基因真核表達載體

4、，檢測其表達情況。 方法：以PET-28a-PRR11為模板，通過PCR擴增PRR11并將之克隆至pcDNA3.1真核表達載體，測序鑒定正確，PCR、Western blot鑒定。 結果：雙酶切鑒定證實目的基因成功克隆到真核表達載體pcDNA3.1中，測序結果序列完全正確，表達載體構建成功，Western Blot檢測表明有目的蛋白表達。結論：成功構建人PRR11基因的真核表達載體，并表達成功。第三部分PRR11細胞定位

5、及初步功能研究目的：構建含GFP-PRR11的真核表達載體，觀察基因在細胞內(nèi)的表達定位以及對細胞周期的影響。方法：以PET-28a-PRR11為模板，通過PCR擴增PRR11并將之克隆至PEGFP-C1真核表達載體，測序鑒定正確，PCR、Westernblot鑒定。 結果：雙酶切鑒定證實目的基因成功克隆到真核表達載體PEGFP-C1中，測序結果序列完全正確，表達載體構建成功，Western Blot檢測表明有目的蛋白表達。