石斛酚、丁香酸與AR基因、iNOS基因相互作用初步研究.pdf

1、目的:
　　研究石斛酚、丁香酸與醛糖還原酶(aldose reductase，AR)基因、一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)基因的相互作用機制，從基因轉(zhuǎn)錄水平闡明石斛抗糖尿病性白內(nèi)障的作用機制。
　　方法:
　　1.采用紫外吸收光譜的全波長掃描并觀察在石斛酚、丁香酸作用前后，AR基因與iNOS基因的最大吸收峰的位置與強度的變化，并測定其結(jié)合常數(shù)。
　　2.利用

2、原子力顯微技術(shù)(AFM)檢測石斛酚、丁香酸對AR基因、iNOS基因分子的表面形貌、結(jié)構(gòu)和高度的影響;
　　3.用表面增強拉曼光譜(SERS)檢測石斛酚、丁香酸與AR基因、iNOS基因在632.8nm激發(fā)波長下40cm-1-4000cm-1波段的譜峰，確定其相互作用的位點。
　　4.在活細(xì)胞條件下，采用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)(FRET)實時檢測石斛酚、丁香酸與晶狀體上皮細(xì)胞內(nèi)的AR基因、iNOS基因結(jié)合的距離以及相互作用的能量轉(zhuǎn)

3、移率。
　　結(jié)果:
　　1.石斛酚與AR基因的相互作用研究結(jié)果:通過紫外可見吸收光譜結(jié)果可以初步判斷石斛酚與AR基因的相互作用方式可能是溝槽結(jié)合，根據(jù)AR基因的最大吸收峰處的吸光度值隨著石斛酚濃度與AR基因濃度的比值變化來看，石斛酚與AR基因作用之間存在很多的結(jié)合位點，并可計算出其結(jié)合常數(shù)為1.85×103L/mol。原子力顯微技術(shù)進一步研究其相互作用，結(jié)果顯示石斛酚可以導(dǎo)致AR基因分子聚集纏繞，平均高度可增加0.3-0.6

4、nm，進一步印證了其相互作用模式。
　　2.石斛酚與iNOS基因相互作用研究:紫外光譜的結(jié)果顯示石斛酚主要通過結(jié)合到iNOS基因的大溝或小溝上與之作用。iNOS基因最大吸收峰處的吸光度值與石斛酚和iNOS基因濃度比值之間呈線性關(guān)系，表示石斛酚與iNOS基因之間存在多處結(jié)合，結(jié)合常數(shù)為7.2×102L/mol。原子力顯微鏡的表面相貌圖的變化顯示石斛酚導(dǎo)致iNOS基因鏈纏繞收縮、聚集，節(jié)點數(shù)增多，平均高度增加。
　　3.丁香酸與

5、AR基因的相互作用研究:從紫外可見吸收光譜圖可以看出AR基因的最大吸收波長隨著丁香酸的濃度增加呈現(xiàn)紅移增色現(xiàn)象，可以推斷其結(jié)合方式為溝槽結(jié)合，同樣存在較多的結(jié)合位點，結(jié)合常數(shù)為2.85×103L/mol。原子力顯微結(jié)果顯示丁香酸與AR基因結(jié)合并導(dǎo)致基因分子纏繞聚集，平均高度增加。表面增強拉曼光譜顯示隨著丁香酸的濃度增加，AR基因處于1493.24cm-1的拉曼譜線強度向高波數(shù)移動(1495.51cm-1)，再次印證二者發(fā)生相互作用。