錳對小鼠室管膜下區(qū)神經(jīng)發(fā)生的影響及機理初探.pdf

1、目的：采用免疫組織化學(xué)技術(shù)及神經(jīng)行為學(xué)的方法研究不同錳濃度對小鼠側(cè)腦室神經(jīng)發(fā)生及其功能的影響，從另一方面探討錳中毒的腦損害及其機制，為職業(yè)性錳中毒的基礎(chǔ)研究及干預(yù)治療提供實驗依據(jù)。
　　方法：1、動物及分組：選用清潔級（SPF）健康的成年雄性昆明小鼠48只，體重在18-22 g之間（由廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，動物許可編號：SCXK桂2010-0002）。適應(yīng)性飼養(yǎng)小鼠1周，讓其適應(yīng)環(huán)境。將選好的小鼠按體重隨機方法分為4組，即

2、對照組（CG）、低劑量錳中毒組（LDG）、中劑量錳中毒組（MDG）、高劑量錳中毒組（HDG），每組12只，做好各組小鼠的編號標記，稱量體重。2、造模前神經(jīng)行為學(xué)檢測：對四組小鼠分別行曠場試驗、懸掛試驗、轉(zhuǎn)輪試驗，做好各組的數(shù)據(jù)記錄。3、制作錳中毒小鼠模型：分別對低劑量錳中毒組（LDG）、中劑量錳中毒組（MDG）、高劑量錳中毒組（HDG）小鼠予腹腔注射不同劑量的氯化錳（MnCl2·4H2O）溶液，劑量分別為3.75mg/kg、7.5 mg

3、/kg、15 mg/kg，溶劑為生理鹽水（0.9％NaCl溶液，滅菌）。其余對照組（CG）小鼠予腹腔注射等體積的生理鹽水（0.9%NaCl溶液，滅菌）。每日定時腹腔注射1次，連續(xù)染錳4周（7d/周，共28d）。造模結(jié)束后，所有的動物均按實驗進展處理。各組小鼠在相同環(huán)境下飼養(yǎng)，12h晝12h夜，自由攝食、飲水。4、造模后神經(jīng)行為學(xué)檢測：造模結(jié)束后3d，分別對各組小鼠行曠場試驗、懸掛試驗和轉(zhuǎn)輪試驗。5、免疫組織化學(xué)染色：用免疫組化技術(shù)檢測四

4、組小鼠的室管膜下區(qū)（SVZ區(qū)）GFAP、DCX的陽性表達，計數(shù)所得免疫組織化學(xué)染色圖像的對應(yīng)陽性細胞數(shù)，做好記錄。統(tǒng)計學(xué)方法：行為學(xué)數(shù)據(jù)用均數(shù)和標準誤（±S）表示，免疫組化染色的數(shù)據(jù)用均數(shù)和標準差（±S）表示。用統(tǒng)計軟件Spss16.0分析各組小鼠曠場試驗、懸掛試驗、轉(zhuǎn)輪試驗、免疫組化染色實驗所得的數(shù)據(jù)。多個均數(shù)比較用單因素方差分析（One-Way NAOVA)，據(jù)方差齊性與否，兩兩比較選擇LSD或Games-Howell檢驗，以雙側(cè)α

5、=0.05作為顯著性檢驗水準。用GraphPad Prism5圖像軟件制作相關(guān)條形圖和折線圖等。
　　結(jié)果：1、行為學(xué)實驗結(jié)果：（1）曠場試驗：造模前，各組小鼠運動的總路程之間均無明顯差異，無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），適合造模條件。與CG組相比，造模后第1d、第2d、第3d，LDG的總運動路程均無明顯縮短，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而MDG和HDG兩組小鼠的總運動路程均明顯縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），MDG和HDG兩組小鼠的

6、總運動路程較LDG組有所縮短，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），MDG和HDG兩組之間無明顯差異。（2）懸掛實驗：造模前，四組小鼠懸繩上的懸掛時間均無明顯差異。與CG組比較，第1d，LDG、MDG和HDG三組小鼠的懸掛時間無明顯縮短，無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），且LDG、MDG、HDG三組小鼠之間亦無明顯差異；而第2d和第3d，LDG、MDG和HDG三組小鼠的懸掛時間均顯著縮短，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）；MDG、HDG兩組小鼠

7、較LDG明顯縮短，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而HDG組小鼠較MDG組無明顯縮短，差異不明顯。（3）轉(zhuǎn)輪試驗：造模前，四組小鼠轉(zhuǎn)輪上停留時間和轉(zhuǎn)輪上滾動距離均無明顯差異。停留時間：與CG相比，第1d、第2d和第3d，LDG、MDG、HDG三組小鼠在轉(zhuǎn)輪上停留的時間均明顯縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；且MDH、HDG兩組小鼠停留的時間較LDG明顯縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而MDG和HDG兩組小鼠之間停留的時間無明

8、顯差異。轉(zhuǎn)動距離：第1d，與CG相比，LDG、MDG和HDG三組小鼠在轉(zhuǎn)輪上轉(zhuǎn)動距離無明顯縮短，且LDG、MDG和HDG三組之間亦無明顯差異
　　（P＞0.05）；第2d和第3d，與CG比較，LDG組小鼠轉(zhuǎn)輪上轉(zhuǎn)動距離無明顯縮短，而MDG、HDG兩組在轉(zhuǎn)輪上轉(zhuǎn)動的距離明顯縮短，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與LDG比較，MDG和HDG兩組在轉(zhuǎn)輪上轉(zhuǎn)動距離有所縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而MDG、HDG兩組之間的差異不具

9、統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2、免疫組化染色結(jié)果：（1）GFAP免疫組化結(jié)果：與CG比較，LDG組在SVZ區(qū)的GFAP陽性細胞數(shù)量無明顯增多，而MDG和HDG兩組在SVZ區(qū)的GFAP陽性細胞數(shù)量均明顯增多，有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）；與LDG相比，MDG和HDG兩組在SVZ區(qū)的GFAP陽性細胞數(shù)量均明顯增多，差異有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001），而HDG較MDG組的SVZ區(qū)GFAP陽性細胞數(shù)無明顯增多，不具統(tǒng)計學(xué)意義。

10、　　（2）DCX免疫組化結(jié)果：與CG比較，LMG組在SVZ區(qū)的DCX陽性細胞數(shù)量無明顯減少，而MDG、HDG兩組在SVZ區(qū)的DCX陽性細胞數(shù)均明顯減少，有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）；與LDG組相比，MDG、HDG兩組在SVZ區(qū)的DCX陽性細胞數(shù)量均明顯減少，有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.001），而MDG、HDG兩組之間在SVZ區(qū)的DCX陽性細胞數(shù)量無明顯差異。
　　結(jié)論：1.錳中毒可以損害小鼠的錐體外系的功能，導(dǎo)致運動能力