高膽固醇環(huán)境對(duì)大鼠肝癌細(xì)胞MCA-RH7777的BSEP和CAV-1表達(dá)情況的影響.pdf

1、目的：
　　既往關(guān)于BSEP及Cav-1所誘發(fā)膽汁淤積、膽石成因相關(guān)機(jī)制研究，多在動(dòng)物水平上;而在細(xì)胞水平上，對(duì)于高膽固醇環(huán)境對(duì)于肝細(xì)胞膽小管側(cè)膜BSEP在肝細(xì)胞膽小管側(cè)膜表達(dá)的調(diào)控機(jī)制相對(duì)較少。本研究探討高膽固醇環(huán)境對(duì)大鼠肝癌細(xì)胞MCA-RH7777的BSEP和CAV-1表達(dá)情況的影響，嘗試從高膽固醇誘導(dǎo)Cav-1高表達(dá)，從而正性調(diào)控BSEP的表達(dá)，影響B(tài)SEP的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制進(jìn)行闡述，為BSEP在肝細(xì)胞膽小管側(cè)膜表達(dá)機(jī)制提供了新的實(shí)

2、驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)，從而研究膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體影響膽汁的分泌的影響因素，進(jìn)而揭示與膽囊膽固醇結(jié)石形成的可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)組采用含有以不同終濃度膽固醇溶液的培養(yǎng)基—實(shí)驗(yàn)組1(膽固醇0.4ng/mL)組;實(shí)驗(yàn)組2(膽固醇1ng/ml)組;實(shí)驗(yàn)組3(膽固醇2ng/ml)作用于大鼠肝癌細(xì)胞MCA-RH7777，同時(shí)設(shè)立對(duì)照組用含有無(wú)水乙醇的培養(yǎng)基組為作用于大鼠肝癌細(xì)胞。應(yīng)用Real time PCR檢測(cè)在不同濃度的膽固醇

3、對(duì)MCA-RH7777細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白BSEP、CAV-1在mRNA水平上表達(dá)的變化情況的影響;應(yīng)用Western blot檢測(cè)在不同濃度的膽固醇對(duì)MCA-RH7777細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白BSEP、CAV-1在蛋白水平上表達(dá)的變化情況的影響;應(yīng)用免疫熒光觀察肝細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白BSEP和CAV-1的定位情況，比較對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組肝細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白BSEP和CAV-1的表達(dá)差異。
　　結(jié)果：
　　1、三組實(shí)驗(yàn)組肝細(xì)胞CAV-1在mRNA水平表

4、達(dá)較對(duì)照組均顯著升高(t1=6.652，t2=13.02，t3=14.61，P＜0.05);實(shí)驗(yàn)組2和實(shí)驗(yàn)組3CAV-1在蛋白水平表達(dá)也較對(duì)照組明顯升高(t2=5.228，t3=13.15，P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組1在蛋白水平上與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t1=4.307，P＞0.05);同時(shí)隨著膽固醇濃度的升高，CAV-1表達(dá)逐漸增高。
　　2、實(shí)驗(yàn)組2和實(shí)驗(yàn)組3肝細(xì)胞BSEP在mRNA水平表達(dá)較對(duì)照組顯著升高(t2=3.384，t3=

5、4.700，P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組1在mRNA水平上與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t1=1.710，P＞0.05);實(shí)驗(yàn)組2和實(shí)驗(yàn)組3在蛋白水平表達(dá)也較對(duì)照組明顯升高(t2=2.967，t3=3.870，P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組1在蛋白水平上與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t1=1.498，P＞0.05);同時(shí)隨著膽固醇濃度的升高，BSEP表達(dá)逐漸增高。
　　3、免疫熒光染色表明BSEP與CAV-1表達(dá)于肝細(xì)胞膽小管側(cè)膜上，同時(shí)實(shí)驗(yàn)組BSEP與CAV

6、-1的表達(dá)情況強(qiáng)于對(duì)照組BSEP與CAV-1的表達(dá)情況。
　　結(jié)論：
　　1、高膽固醇環(huán)境刺激MCA-RH7777細(xì)胞BSEP在膽小管側(cè)膜mRNA水平、蛋白水平表達(dá)顯著升高。
　　2、高膽固醇環(huán)境刺激MCA-RH7777細(xì)胞cav-1在膽小管側(cè)膜mRNA水平、蛋白水平表達(dá)顯著升高。
　　3、高膽固醇環(huán)境可以正性調(diào)控Cav-1的表達(dá)，高膽固醇可能與CAV-1的表達(dá)之間存在一定的關(guān)聯(lián)。
　　4、高膽固醇環(huán)境可以