復(fù)方降脂3號(hào)對(duì)高膽固醇飲食新西蘭白兔膽固醇-膽汁酸代謝影響的研究.pdf

1、第一部分復(fù)方降脂3號(hào)對(duì)高膽固醇飲食新西蘭白兔總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇及膽汁酸水平的影響
　　 目的:觀察復(fù)方降脂3號(hào)對(duì)高膽固醇飲食新西蘭白兔血清總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇及膽汁酸水平的影響。
　　 方法:24只健康雄性新西蘭白兔分為三組:對(duì)照組、高膽固醇血癥模型組(模型組)以及復(fù)方降脂3號(hào)干預(yù)組(干預(yù)組)。對(duì)照組兔用常規(guī)兔糧飼養(yǎng)4周;模型組、干預(yù)組兔用高膽固醇飲食(由復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,含1％膽固醇

2、)4周以造成高膽固醇血癥。造模的同時(shí),給予干預(yù)組新西蘭白兔以復(fù)方降脂3號(hào)(由生黃芪、澤瀉、黃連、郁金、生蒲黃、山楂和麥芽七味中藥組成)灌胃(每晨給予半包/20mL蒸餾水)以觀察干預(yù)作用。觀察指標(biāo)主要包括兔耳緣靜脈血清總膽固醇水平(CHO)、低密度脂蛋白膽固醇水平(LDL-C)及膽汁酸水平(隊(duì))。
　　 結(jié)果:造模過(guò)程中,三組白兔均未產(chǎn)生腹瀉或便秘現(xiàn)象。4周造模結(jié)束時(shí),對(duì)照組、模型組及干預(yù)組血清總膽固醇水平分別為4.51±0.45

3、mmol/L、23.14±3.21mmol/L和16.21±2.14mmol/L。模型組、干預(yù)組血清總膽固醇水平均較對(duì)照組上升(P＜0.01),干預(yù)組血清總膽固醇水平較模型組下降(P＜0.01)。對(duì)照組、模型組及干預(yù)組血清低密度脂蛋白膽固醇水平分別為1.37±0.27mmol/L、18.26±2.51mmol/L和11.80±1.98mmol/L。模型組、干預(yù)組血清低密度脂蛋白膽固醇水平均較對(duì)照組上升(P＜0.01),干預(yù)組血清低密度脂

4、蛋白膽固醇水平較模型組下降(P＜0.01)。
　　 對(duì)照組、模型組及干預(yù)組膽汁酸水平分別為7.45±1.33μmol/L,13.95±1.86μmol/L和13.31±1.27μmol/L,模型組膽汁酸水平較對(duì)照組上升(P＜0.01);干預(yù)組膽汁酸水平較模型組上升(P＜0.01);模型組和干預(yù)組膽汁酸水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 討論:復(fù)方降脂3號(hào)可以降低高膽固醇飲食誘導(dǎo)新西蘭白兔高膽固醇血癥的血清總膽固

5、醇水平和低密度脂蛋白膽固醇水平。
　　 第二部分復(fù)方降脂3號(hào)對(duì)高膽固醇飲食新西蘭白兔肝臟CYP7AlmRNA水平和CYP7Al活性的影響
　　 目的:觀察復(fù)方降脂3號(hào)對(duì)高膽固醇飲食新西蘭白兔肝臟CYP7A1 mRNA水平和CYP7Al活性的影響,探討復(fù)方降脂3號(hào)調(diào)節(jié)膽固醇-膽汁酸代謝降低血膽固醇水平的作用機(jī)制。
　　 方法:造模及干預(yù)方法同第一部分。4周實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,采用空氣栓塞方法處死實(shí)驗(yàn)白兔進(jìn)行解剖,并從相同部

6、位采取肝臟標(biāo)本,迅即以超低溫保存(先放入液氮中暫時(shí)保存,再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中保存)。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)肝臟組織中CYP7Al mRNA的表達(dá),用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定肝臟組織中CYP7Al的活性。
　　 結(jié)果:造模過(guò)程中,三組白兔均未產(chǎn)生腹瀉或便秘。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)肝臟組織中CYP71 mRNA表達(dá),實(shí)驗(yàn)結(jié)果為:對(duì)照組、模型組和干預(yù)組肝臟組織CYP7Al mRNA的表達(dá)分別為1.97±1.50、0.70±0.2

7、7和3.87±1.68。模型組CYP7AlmRNA較對(duì)照組降低(P＜0.01);干預(yù)組CYP7AlmRNA較對(duì)照組升高(P＜0.01);干預(yù)組CYP7AlmRNA較模型組升高(P＜0.01)。
　　 采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定肝臟組織中CYP7Al的活性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果為:對(duì)照組、模型組和干預(yù)組肝臟組織中CYP7Al濃度分別為0.80±0.22μg/ml、0.44±0.16μg/ml和0.81±0.21μg/ml。模型組CYP7Al活性組

8、較對(duì)照組降低(P＜0.01);干預(yù)組CYP7Al活性與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);干預(yù)組CYP7Al活性組較模型組升高(P＜0.01)。
　　 討論:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:模型組CYP7AlmRNA表達(dá)和CYP7Al活性較對(duì)照組降低;干預(yù)組CYP7AlmRNA表達(dá)和CYP7Al活性較模型組升高。提示高膽固醇飲食引起血清膽汁酸水平升高,CYP7AlmRNA的表達(dá)下降,CYP7Al活性下降,抑制膽汁酸經(jīng)典合成途徑。應(yīng)用復(fù)方降脂3

9、號(hào)可促進(jìn)CYPTAlmRNA的表達(dá)上調(diào),CYP7Al活性升高,使肝內(nèi)膽固醇向膽汁酸轉(zhuǎn)化增加,導(dǎo)致血膽固醇水平下降。
　　 第三部分復(fù)方降脂3號(hào)對(duì)高膽固醇飲食新西蘭白兔肝臟BSEP mRNA、SHP mRNA和LDL mRNA表達(dá)的影響
　　 目的:觀察復(fù)方降脂3號(hào)對(duì)高膽固醇飲食新西蘭白兔肝臟組織BSEP mRNA、SHPmRNA和LDL mRNA表達(dá)的影響,進(jìn)一步探討復(fù)方降脂3號(hào)干預(yù)作用的作用機(jī)制。
　　 方法:

10、造模及干預(yù)方法同第一部分。肝臟標(biāo)本采集及保存同第二部分。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)試驗(yàn)白兔肝臟組織BSEP mRNA、SHP mRNA和LDL mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:對(duì)照組、模型組、干預(yù)組新西蘭白兔肝臟組織BSEP mRNA表達(dá)如下:7.33±2.44、16.40±3.01和9.64±1.63。模型組BSEP mRNA表達(dá)較對(duì)照組BSEP mRNA表達(dá)明顯升高(P＜0.01);干預(yù)組BSEP mRNA表達(dá)較模型組BSEP

11、 mRNA表達(dá)明顯下降(P＜0.01);但高于對(duì)照組BSEP mRNA的表達(dá)(P＜0.01)。
　　 對(duì)照組、模型組、干預(yù)組新西蘭白兔肝臟組織SHP mRNA表達(dá)如下:9.83±2.5085.44±6.79和20.73±4.47。模型組SHP mRNA表達(dá)較對(duì)照組SHP mRNA表達(dá)明顯升高(P＜0.01);干預(yù)組SHP mRNA表達(dá)較模型組SHP mRNA表達(dá)明顯下降(P＜0.01);但高于對(duì)照組SHP mRNA的表達(dá)(P＜0

12、.01)。
　　 對(duì)照組、模型組、干預(yù)組新西蘭白兔肝臟組織LDL mRNA表達(dá)如下:5.76±1.963.29±1.58和9.38±2.86。模型組LDL mRNA表達(dá)較對(duì)照組LDL mRNA表達(dá)明顯下降(P＜0.01);干預(yù)組LDL mRNA表達(dá)較模型組LDL mRNA表達(dá)明顯升高(P＜0.01);亦高于對(duì)照組LDL mRNA的表達(dá)(P＜0.01)。
　　 討論:4周后對(duì)實(shí)驗(yàn)白兔肝臟組織FXR靶基因BSEP mRNA和