高脂培養(yǎng)條件下槲皮素對大鼠肝細(xì)胞膽固醇代謝的影響.pdf

1、目的：
　　在高脂環(huán)境下，用不同濃度的槲皮素干預(yù)大鼠肝細(xì)胞，測定干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)外膽固醇含量的變化情況，同時檢測細(xì)胞活力，選定適宜的干預(yù)劑量；從細(xì)胞和分子水平上分析槲皮素對膽固醇代謝的具體作用，揭示槲皮素可能的作用機(jī)制，為充分認(rèn)識植物化學(xué)物作用的多樣性以及合理應(yīng)用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1．高脂血清的制備：灌胃給予雄性Wistar大鼠高脂乳劑一周，建立大鼠高脂血癥模型，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，無菌條件下眼眶取血，離心取血

2、清。
　　2．高脂培養(yǎng)模型的建立：測定正常組和高脂組血清中膽固醇相關(guān)指標(biāo)，判定高脂血癥模型是否建立成功，然后用10％高脂血清加90%培養(yǎng)液配制成高脂血清培養(yǎng)液。
　　3.槲皮素適宜干預(yù)濃度的探討：首先采用含0、5、10和20μmol/L槲皮素的10%胎牛血清培養(yǎng)液干預(yù)培養(yǎng)BRL肝細(xì)胞24h，換液，用含0、5、10和20μmol/L槲皮素的10%高脂血清培養(yǎng)液干預(yù)培養(yǎng)BRL肝細(xì)胞48h，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行細(xì)胞活力和細(xì)胞凋亡相關(guān)指標(biāo)

3、的檢測，然后測定培養(yǎng)液和細(xì)胞內(nèi)膽固醇相關(guān)指標(biāo)的變化。
　　4．在上述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選定最適干預(yù)濃度，實(shí)驗(yàn)方法同上，進(jìn)一步研究槲皮素對BRL肝細(xì)胞膽固醇代謝影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時測定細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)膽固醇代謝的蛋白，以及關(guān)鍵酶的表達(dá)與活性。
　　結(jié)果：
　　1．灌胃給予雄性Wistar大鼠高脂乳劑一周后，無菌條件下取血，離心取血清，血清中TC、FCH和LDL-C含量與灌胃前比較均顯著升高。
　　2.分別用含10%正常血清和10

4、%高脂血清培養(yǎng)液培養(yǎng)肝細(xì)胞24h后，測定培養(yǎng)液中膽固醇相關(guān)指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)高脂培養(yǎng)液中TC、 FCH和LDL-C均顯著高于正常培養(yǎng)液；用10%正常血清培養(yǎng)肝細(xì)胞24h后，換液為10%高脂血清繼續(xù)培養(yǎng)48h，發(fā)現(xiàn)高脂血清干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)的TC和FCH含量均顯著升高。
　　3.在高脂環(huán)境下，用不同濃度的槲皮素干預(yù)大鼠肝細(xì)胞后，MTT檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)與其他三組相比20μmol/L槲皮素可使細(xì)胞活力顯著下降，且隨著槲皮素濃度的升高，AST和ALT均有上

5、升趨勢,但LDH無明顯變化，可能是相關(guān)指標(biāo)不敏感。細(xì)胞凋亡檢測結(jié)果顯示隨著槲皮素濃度的升高，細(xì)胞凋亡率升高，且20μmol/L槲皮素組與0、5μmol/L組有顯著差異，所以我最終選擇10μmol/L槲皮素為干預(yù)劑量。
　　4．在高脂環(huán)境下，用不同濃度的槲皮素干預(yù)BRL肝細(xì)胞后，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著槲皮素濃度的升高，培養(yǎng)液中的TC、FCH和CE濃度均下降，LDL-C濃度變化無統(tǒng)計學(xué)意義。與0μmol/L槲皮素相比較，10和20μmol/

6、L槲皮素可顯著降低培養(yǎng)液中TC、FCH和CE含量；同時隨著槲皮素濃度的
　　升高細(xì)胞內(nèi)TC和FCH含量雖有一定的下降趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異,CE含量無明顯變化。
　　5.與對照組相比較，10μmol/L槲皮素顯著降低HMGCR活性及其mRNA和蛋白的表達(dá),顯著升高LDLR、SREBP-2、ABCA1和LXRαmRNA和蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　在高脂環(huán)境下，10μmol/L槲皮素干預(yù)對BRL肝細(xì)胞膽固醇代謝有顯