離體條件下銅對草魚和黃顙魚肝細胞脂代謝影響的研究.pdf

1、銅作為一種常見的重金屬，同時又是魚類生長的必需元素，它對魚類的影響已經引起了廣泛的關注。以往的研究主要集中在氧化應激、蓄積作用和組織學變化等方面，而關于銅對脂代謝的影響，尤其是采用離體細胞作為實驗模型的研究還未見報道。本文以草魚肝細胞系為研究對象，研究了銅對草魚肝細胞脂代謝的影響以及硒的保護作用，同時以黃顙魚為研究對象，建立了黃顙魚離體肝細胞模型，研究了銅對黃顙魚離體肝細胞脂代謝的影響以及可能存在的通路。主要研究結果如下:
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2、.以草魚肝細胞系為模型，選取3個銅濃度(0、10μM、100μM)和3個孵育時間(24h、48h、96h)來研究離體條件下銅對草魚肝細胞脂代謝的影響。研究結果表明，離體條件下銅對草魚肝細胞脂代謝的影響呈現劑量和時間依賴關系:孵育24h時，銅降低了幾種脂肪合成和脂肪分解相關的基因表達水平;孵育48h時，銅抑制了脂肪合成的過程，但上調了脂肪分解;孵育96h時，與對照組相比，銅繼續(xù)上調脂肪分解作用，對脂肪合成作用沒有顯著影響，但引起脂肪消耗。

3、盡管孵育96h脂肪合成作用有可能被上調，但這不足以補償脂肪的消耗。本文首次研究了離體條件下銅對魚類肝細胞脂代謝的劑量和時間依賴關系，為研究銅對魚類酶學和分子水平的毒性提供了新的思路。
　　2.以草魚肝細胞系為模型，評價了離體條件下，兩種濃度硒（5μM和10μM）的添加是否具有阻止銅誘導的草魚肝細胞脂代謝改變的能力。結果顯示:在3個銅添加組(100μM)中，孵育24h時隨著硒濃度的增加，脂肪合成相關酶活性升高，而分解相關酶活性下降。

4、與對照組相比，單獨的銅或者是與硒的聯合作用在24h會下調所有測定的基因的表達，在48h會下調脂肪合成相關基因的表達，但會上調脂肪分解相關基因的表達，從而在48h會降低甘油三酯含量。因此，本研究表明，硒的添加對銅引起的脂代謝改變具有雙重作用，低濃度有保護作用，高濃度表現出一定的毒性，而且存在一定的時間效應。
　　3.建立了黃顙魚原代肝細胞的培養(yǎng)方法，為研究脂代謝提供了理想的體外模型。肝細胞采用含有EDTA的0.25％的胰酶進行消化，

5、每克肝重可獲得4.03×107個細胞，細胞成活率達95％。以此為模型，選取4個不同的銅濃度(0、5μM、10μM、50μM)和3個孵育時間(0、24h、48h)來研究離體條件下銅對黃顙魚離體肝細胞脂代謝的影響。結果表明，銅對黃顙魚離體肝細胞脂代謝的影響呈現濃度特異性:10μMCu引起脂肪消耗，可能源于脂肪分解過程的上調。而50μM銅引起脂肪消耗，可能源于脂肪合成過程的下調。而且，10μMCu誘導的脂肪分解可受PPARα阻斷劑GW6471