OPN誘導(dǎo)小鼠BMSCs向表皮細(xì)胞分化促進(jìn)創(chuàng)面愈合的研究.pdf

1、背景：
　　皮膚創(chuàng)面愈合是一個(gè)極其復(fù)雜的病理、生理過程，需要多種細(xì)胞、細(xì)胞因子共同參與并且涉及炎癥反應(yīng)、血管生成、肉芽組織形成和組織重塑，其中皮膚損傷后皮膚表面的完整性需要表皮細(xì)胞再生以維持。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外分離、培養(yǎng)后仍然保持了多向分化能力和自我更新能力，其中向表皮細(xì)胞分化已經(jīng)被廣大研究者應(yīng)用于創(chuàng)面修復(fù)[1]。骨橋蛋白屬于細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，過去的大量研究表明在參與創(chuàng)面修復(fù)的過程中，骨橋蛋白對炎癥細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等各種細(xì)胞作用的

2、發(fā)揮都起著重要調(diào)控作用。既往研究發(fā)現(xiàn)，創(chuàng)面組織內(nèi)聚集的大量骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與創(chuàng)面局部高表達(dá)的骨橋蛋白存在密切的聯(lián)系。研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在分化為表皮細(xì)胞、促進(jìn)創(chuàng)面愈合過程中骨橋蛋白發(fā)揮的重要作用，無疑對促進(jìn)損傷皮膚結(jié)構(gòu)和功能的完全修復(fù)是十分必要的。
　　目的：
　　以骨橋蛋白基因敲除小鼠和野生型小鼠作為研究對象，探討骨橋蛋白在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體內(nèi)、體外分化為表皮細(xì)胞過程中發(fā)揮的作用。
　　方法：
　　1.體外實(shí)驗(yàn)

3、:實(shí)驗(yàn)分兩個(gè)組，野生型組(WT)和骨橋蛋白基因敲除型組(KO)，分離培養(yǎng)野生型和基因敲除型新生鼠（鼠齡1天）的BMSCs，流式鑒定其純度后，取第3代分別在表皮轉(zhuǎn)化培養(yǎng)體系中孵育，通過鏡下觀察、流式細(xì)胞檢測、免疫熒光染色、Western Blot等方法，比較兩組表皮細(xì)胞標(biāo)志物角質(zhì)形成蛋白14(CK14)表達(dá)水平的差異。
　　2.動物實(shí)驗(yàn):動物實(shí)驗(yàn)分為4個(gè)組:野生型小鼠創(chuàng)周注射GFP-MSCs組，即WT/MSCs組，按相同的方法，其他

4、3個(gè)組分別為WT/PBS組，KO/MSCs組，KO/PBS組。每組均采用8只雄鼠，鼠齡在6～8周左右，體重20～25g;將分離培養(yǎng)的GFP-MSCs和PBS按以上的分組注射到創(chuàng)周。從術(shù)后第1天開始，連續(xù)7天創(chuàng)面拍照，計(jì)算每組的創(chuàng)面愈合率，并在小動物成像儀下觀察GFP-MSCs向創(chuàng)面遷移的情況;分別在術(shù)后第3、5、7天切取創(chuàng)面組織進(jìn)行HE染色觀察創(chuàng)面生長變化，免疫熒光染色檢測GFP-MSCs向表皮細(xì)胞分化的情況。
　　結(jié)果：

5、　　1.分離培養(yǎng)的BMSCs純度超過90％，細(xì)胞形態(tài)呈梭形或成纖維細(xì)胞樣;
　　2.BMSCs體外誘導(dǎo)分化后免疫熒光染色結(jié)果顯示，誘導(dǎo)分化后WT和KO組的細(xì)胞均表達(dá)CK14，WT組的表達(dá)陽性率明顯高于KO組(P＜0.01);
　　3.BMSCs體外誘導(dǎo)分化后WB檢測CK14的表達(dá)量，WT組明顯高于KO組（P＜0.01）;
　　4.WT/MSCs組創(chuàng)緣注射的GFP-MSCs向創(chuàng)面中心遷移的速度較KO/MSCs組快，并且遷

6、移的數(shù)量也較KO/MSCs組多（P＜0.01）;
　　5.動物實(shí)驗(yàn):以WT/PBS組作為對照，KO/PBS組的創(chuàng)面愈合速度較對照組慢(P＜0.05)，同樣以WT/PBS組作為對照，WT/MSCs組的創(chuàng)面愈合速度較對照組快(P＜0.05);
　　6.創(chuàng)周注射的GFP-MSCs可以分化為表皮細(xì)胞，其分化能力KO/MSCs組明顯弱于WT/MSCs組(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.骨橋蛋白能夠增強(qiáng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞