不同濃度HGF及EGF體外誘導(dǎo)兔BMSCs向肝細(xì)胞分化的研究.pdf

1、目的：通過(guò)不同濃度肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor，HGF）和表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（epidermal cell growth factor，EGF）體外誘導(dǎo)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone mesenchymal stem cells，BMSCs）向肝細(xì)胞分化，以探討HGF和EGF的最適濃度組合。 方法：密度梯度離心法分離兔BMSCs，體外培養(yǎng)，傳代純化。建立以HGF（30.0ug/L）+EGF（1.5

2、mg/L）、HGF（40.0ug/L）+EGF（2.5mg/L）、HGF（50.0ug/L）+EGF（3.5mg/L）、HGF（60.0ug/L）+EGF（4.5mg/L）為誘導(dǎo)的培養(yǎng)體系。觀察誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，于7、14、21、28d采用免疫細(xì)胞化學(xué)及免疫熒光分別檢測(cè)肝細(xì)胞表面標(biāo)志甲胎蛋白（alpha fetoprotein AFP）及白蛋白（albumin ALB），留取不同時(shí)段培養(yǎng)上清液，用溴甲酚綠法（bromcresol gr

3、een BCG）檢測(cè)上清液中ALB含量，用尿素合成試驗(yàn)檢測(cè)尿素含量。 結(jié)果：14d開(kāi)始可觀察到多極性的肝細(xì)胞樣細(xì)胞，呈短梭形和多角形，隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)（21d）形成多細(xì)胞集落，各組形態(tài)學(xué)比較無(wú)明顯差異。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)，7d時(shí)AFP表達(dá)陽(yáng)性，14d達(dá)最大值后即開(kāi)始下降（P<0.05），各濃度組間表達(dá)無(wú)差別（P>0.05）。免疫熒光檢測(cè)，14d開(kāi)始ALB表達(dá)陽(yáng)性，1組、4組各時(shí)間點(diǎn)比較無(wú)差別（P>0.05），2組及3組隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)

4、，陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)增加（P<0.05）?？v向比較：總體上各組之間有顯著性差異，且濃度越高，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)越高（P<0.05）。兩兩比較，在14d時(shí)1組與2組無(wú)差別，在21d時(shí)2組與3組表達(dá)無(wú)差別，28d時(shí)3組與4組表達(dá)無(wú)差別（p>0.05）。溴甲酚綠法檢測(cè)，12d細(xì)胞培養(yǎng)上清液中可檢測(cè)到ALB，ALB含量在早期（9-15d）表現(xiàn)為濃度越高含量越高（（P<0.05），18或21d達(dá)高峰后下降，此時(shí)各濃度組間含量無(wú)差別（p>0.05），最高峰值在