RNAi誘導小鼠ES細胞向神經(jīng)細胞分化的研究.pdf

1、～；9053ZI／分類號墅望墨』單位代碼：10159學號：200321022中回鏊升夫拳碩士學位論文題目：RNAi誘導小鼠ES細胞向神經(jīng)細胞分化的研究InductionofmOUSeembryonicstemcellstoDeuron—IikecellswithRNAi研究生：主盔墾導師：廛重主學科專業(yè)：壘蔓生塹塋論文課題起止時間：—2004g—sB2005#lo，E1_論文完成時間：!堂圭!旦()垂匿)RNAi誘導小鼠Es細胞向神經(jīng)細

2、胞分化的研究刖吾RNAi技術是近年來新興的、十分有效的干擾細胞基因表達的手段，它能阻滯哺乳動物特異性基因的表達，成劑量依賴性，而且其操作簡單、時間短，因此比傳統(tǒng)方法(反義核苷酸技術、基因敲除等)能更快更方便地使基因表達沉默或基因表達降低，從而為干細胞相關基因功能的研究提供了更有效的工具。胚胎于細胞(embryonicstemceils，ESCs)來源于著床前胚胎的囊胚期內(nèi)細胞團(innercellmass，ICM)，具有發(fā)育全能性。神經(jīng)

3、細胞被認為是終末分化細胞，其損傷后很難再由自體的神經(jīng)干細胞補充。研究ESCs向神經(jīng)細胞分化不僅可以應用于I臨床，為神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如帕金森癥、癲癇、腦卒中等患者進行細胞移植，使其盡快康復；還可以作為研究哺乳動物神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的體外模型，了解神經(jīng)分化過程中基因表達調(diào)控的變化，并方便進行增減基因操作。直接移植ESCs會有致瘤性，因此體外誘導ESCs向神經(jīng)細胞分化的純度、比例是解決細胞移植治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病臨床應用的關鍵點。ESCs體外分化很難控制

4、，細胞的特化過程還不清楚，分化步驟也是經(jīng)驗性的，產(chǎn)生的結(jié)果多變、細胞混雜。目前常用誘導方法包括使用特異性誘導劑，“五步誘導法”，還有尚有爭議的基質(zhì)細胞共培養(yǎng)法，以及基因轉(zhuǎn)染與篩選，但有操作復雜、費用高、毒性大等缺點。本課題組在先前的研究中，通過“序貫誘導法”誘導小鼠ESCs分化為神經(jīng)細胞，并進行了基因芯片分析。本實驗根據(jù)基因芯片分析，篩選神經(jīng)細胞分化主導調(diào)控基因，利用RNAi技術對其分化機制進行初步的探討，探索出一種直接在分子水平上簡便