中樞輸注Sfrp5對高脂誘導下丘腦炎癥大鼠肝臟VLDL-TG的分泌調(diào)控及其機制.pdf

1、第一部分：高脂飲食對大鼠下丘腦Sfrp5及Wnt配體表達的影響
　　目的：探討高脂飲食對大鼠下丘腦Sfrp5及Wnt配體表達的影響。
　　方法：將SD雄性大鼠以普食和高脂飼料喂養(yǎng)16周后分別分為普食組（Normal chow diet,NCD）和高脂組（High fat diet,HFD）。采用Real-time PCR分別檢測2組大鼠下丘腦Wnt5a、TNFα的表達情況；采用Western blot方法分別檢測2組大鼠下丘

2、腦Sfrp5、JNK、p-JNK的表達情況。
　　結(jié)果：高脂大鼠下丘腦 Wnt5a的 mRNA較普食組明顯升高（P＜0.05）。TNFα的mRNA含量較普食大鼠下丘腦顯著升高（P＜0.01）；同時高脂大鼠下丘腦Wnt5a蛋白含量、p-JNK/JNK蛋白含量比值較普食組明顯升高（P＜0.01，P＜0.05）。而高脂大鼠下丘腦Sfrp5蛋白含量較普食組明顯降低（P＜0.01）。
　　結(jié)論：高脂飲食可以導致下丘腦炎癥，同時引起下丘

3、腦Sfrp5表達下降。
　　第二部分：中樞輸注Sfrp5通過抑制JNK通路降低高脂誘導下丘腦炎癥大鼠肝臟VLDL-TG的分泌
　　目的：探討中樞輸注Sfrp5對高脂飲食誘導下丘腦炎癥大鼠肝臟VLDL-TG分泌的影響。
　　方法：選取普食和高脂喂養(yǎng)16周的SD大鼠，構(gòu)建大鼠第三腦室微量給藥系統(tǒng)，根據(jù)腦室輸注液體不同將大鼠分為普食+人工腦脊液組(ICV aCSF)+NCD，普食+Sfrp5組（ICV Sfrp5）+NCD；

4、高脂+人工腦脊液組(ICV aCSF）+HFD，高脂+Sfrp5組(ICV Sfrp5)+HFD，同時給予高脂大鼠外周輸注Sfrp5，分為高脂+生理鹽水靜脈輸注組（HFD+Saline，iv），高脂+Sfrp5靜脈輸注組（HFD+Sfrp5，iv）。靜脈注射Tyloxapol抑制血漿脂蛋白水解酶，采用生化方法檢測血漿甘油三酯（TG）、游離脂肪酸（FFA）含量并評估血漿VLDL-TG的變化，同時運用Western blot檢測各組下丘腦J

5、NK，p-JNK蛋白表達的變化。
　　結(jié)果：與(ICV aCSF)+HFD相比，(ICV Sfrp5)+HFD組能明顯降低血漿 TG水平，同時抑制 VLDL-TG的分泌，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），但各組血漿FFA水平無變化（P＞0.05）；與(ICV aCSF)+NCD組相比，（ICV Sfrp5）+NCD組血漿TG、FFA水平、VLDL-TG分泌率變化均無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）;同時（HFD+Sfrp5，iv）組血漿

6、FFA、TG含量、VLDL-TG分泌率較（HFD+aCSF，iv）相比均無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。除此之外，與(ICV aCSF)+NCD相比，（ICV Sfrp5）+NCD下丘腦內(nèi)p-JNK/JNK含量無統(tǒng)計學意義。而(ICV Sfrp5）+HFD組下丘腦p-JNK/JNK含量明顯低于(ICV aCSF）+HFD組（P＜0.01）。
　　結(jié)論：中樞輸注Sfrp5通過抑高脂大鼠下丘腦JNK通路降低肝臟VLDL-TG的分泌。

7、r>　　第三部分：中樞輸注Sfrp5依賴下丘腦ATP敏感性鉀通道降低高脂誘導下丘腦炎癥大鼠肝臟VLDL-TG的分泌
　　目的：探討下丘腦ATP敏感性鉀通道在Sfrp5降低高脂大鼠肝臟VLDL-TG分泌過程中的作用。
　　方法：選取高脂和普食喂養(yǎng)16周的SD大鼠，構(gòu)建大鼠第三腦室微量給藥系統(tǒng)，根據(jù)腦室輸注液體不同將高脂大鼠分為：第三腦室輸注人工腦脊液組：（ICV aCSF）+HFD組，第三腦室輸注Glibenclamide組：

8、（ICV Glibenclamide）+HFD組，第三腦室輸注Sfrp5組，(ICV sfrp5)+HFD組，第三腦室輸注Sfrp5和Glibenclamide組：ICV（sfrp5+Glibenclamide）+HFD組，以及第三腦室輸注 Diazoxide組：（ICV Diazoxide）+HFD組。同時將普食大鼠分為：第三腦室輸注人工腦脊液組：(ICV aCSF)+NCD組，第三腦室輸注Sfrp5組：（ICV Sfrp5）+NCD

9、組，第三腦室輸注Diazoxide組：（ICV Diazoxide）+NCD。靜脈注射Tyloxapol抑制血漿脂蛋白水解酶，采用生化方法檢測血漿TG含量并評估血漿VLDL-TG分泌率的變化。
　　結(jié)果：與第三腦室輸注人工腦脊液組即：（ICV aCSF）+HFD相比，第三腦室輸注Sfrp5組即：(ICV sfrp5)+HFD組可以明顯降低血漿TG含量及VLDL-TG的分泌（P＜0.01），而當Sfrp5聯(lián)合Glibenclamid

10、e時，該作用被抑制。但單獨輸注Glibenclamide無法降低血漿TG含量和VLDL-TG的分泌。同時，與（ICV aCSF）+HFD組相比，高脂大鼠輸注Diazoxide組，即（ICV Diazoxide）+HFD組明顯降低血漿TG水平和VLDL-TG分泌率（P＜0.01）；與普食對照組即(ICV aCSF)+NCD相比，（ICV Diazoxide）+NCD同樣可以有效降低TG含量及VLDL-TG分泌率（P＜0.01）。
　

11、　結(jié)論：中樞輸注Sfrp5依賴下丘腦ATP敏感性鉀通道降低高脂大鼠肝臟VLDL-TG的分泌。
　　第四部分：中樞輸注Sfrp5依賴“腦-肝軸“降低高脂誘導下丘腦炎癥大鼠肝臟VLDL-TG的分泌
　　目的：探討中樞輸注Sfrp5降低高脂大鼠肝臟VLDL-TG的分泌是否依賴“腦-肝軸”。
　　方法：選取高脂喂養(yǎng)16周的SD大鼠，構(gòu)建大鼠第三腦室微量給藥系統(tǒng)，第四腦室孤束核微量注射系統(tǒng)，肝迷走神經(jīng)離斷模型。實驗中分為第三腦室

12、輸注人工腦脊液+迷走神經(jīng)復(fù)合體輸注生理鹽水組：ICV（aCSF）+DVC（Saline），第三腦室輸注人工腦脊液+迷走神經(jīng)復(fù)合體輸注MK801組：ICV（aCSF）+DVC（MK801）組，第三腦室輸注Sfrp5+迷走神經(jīng)復(fù)合體輸注生理鹽水組：ICV（Sfrp5）+DVC（Saline），第三腦室輸注Sfrp5+迷走神經(jīng)復(fù)合體輸注MK801組：ICV（Sfrp5）+DVC（MK801）組；肝迷走神經(jīng)離斷假手術(shù)+第三腦室輸注人工腦脊液組：

13、Sham Vx+ICV（aCSF），肝迷走神經(jīng)離斷術(shù)+第三腦室輸注人工腦脊液組：Hep Vx+ICV（aCSF），肝迷走神經(jīng)離斷假手術(shù)+第三腦室輸注Sfrp5組：Sham Vx+ICV（Sfrp5），肝迷走神經(jīng)離斷術(shù)+第三腦室輸注Sfrp5組：Hep Vx+ICV（Sfrp5），靜脈注射Tyloxapol抑制血漿脂蛋白水解酶，采用生化方法檢測血漿甘油三酯含量并評估血漿VLDL-TG的變化。
　　結(jié)果：DVC輸注MK801可以阻斷中

14、樞輸注Sfrp5對高脂大鼠肝臟VLDL-TG分泌率的作用，但單獨向DVC輸注MK801無此作用。除此之外，肝臟迷走神經(jīng)離斷后，中樞輸注 Sfrp5降低高脂大鼠肝臟VLDL-TG的作用被抑制。
　　結(jié)論：中樞輸注Sfrp5依賴“腦-肝軸“降低高脂誘導下丘腦炎癥大鼠肝臟VLDL-TG的分泌。
　　第五部分：中樞輸注Sfrp5降低高脂大鼠VLDL-TG的分泌率依賴肝臟SCD1的作用
　　目的：探討中樞輸注Sfrp5降低高脂大

15、鼠肝臟VLDL-TG的分泌的肝內(nèi)機制。
　　方法：采用Western blot檢測第三腦室輸注人工腦脊液組：ICV aCSF組，第三腦室輸注Glibenclamide組：ICV Glibenclamide組，第三腦室輸注 Sfrp5組：（ICV sfrp5）組以及第三腦室輸注 Sfrp5和Glibenclamide組： ICV（Sfrp5+ Glibenclamide）組中肝 FAS, DGAT1,DGAT2,SCD1,MTP的蛋