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1、目的:
以瓊玉膏干預(yù)D-半乳糖致亞急性衰老大鼠模型的下丘腦為研究部位,在前期實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)上,對(duì)通過蛋白質(zhì)組學(xué)中的iTRAQ技術(shù)質(zhì)譜鑒定查找瓊玉膏干預(yù)衰老大鼠下丘腦的差異蛋白進(jìn)行分析,尋找出差異倍數(shù)明顯的候選差異蛋白。再查閱相關(guān)延緩衰老文獻(xiàn)及生物信息學(xué)分析技術(shù)對(duì)候選差異蛋白分析,最終確定下丘腦炎癥引起機(jī)體衰老相關(guān)的差異蛋白,并對(duì)其進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其差異蛋白的表達(dá)量水平,進(jìn)一步探究瓊玉膏通過下丘腦延緩機(jī)體衰老的作用機(jī)制,同時(shí)指導(dǎo)下
2、丘腦炎癥引發(fā)機(jī)體衰老的未來研究。
方法:
1.對(duì)前期實(shí)驗(yàn)通過蛋白質(zhì)組學(xué)中的iTRAQ技術(shù)質(zhì)譜鑒定查找瓊玉膏干預(yù)衰老大鼠下丘腦的差異蛋白進(jìn)行分析,鑒定比對(duì)瓊玉膏組與模型組的295種差異蛋白,篩選出差異倍數(shù)≥1.30的差異蛋白。
2.對(duì)篩選出差異倍數(shù)≥1.30的差異蛋白并進(jìn)行排序比對(duì),通過查閱差異蛋白相關(guān)延緩衰老文獻(xiàn),并進(jìn)行生物信息學(xué)分析,找出瓊玉膏延緩衰老的候選靶蛋白,在確定與下丘腦炎癥通路相關(guān)的蛋白。
3、> 3.利用免疫印跡法(Western Blot)檢測(cè)和重要指標(biāo)做熒光定量PCR(Q-PCR)進(jìn)行分析,觀察瓊玉膏干預(yù)下丘腦炎癥相關(guān)蛋白的表達(dá)水平變化,通過下丘腦炎癥相關(guān)蛋白的不同表達(dá)水平的變化解釋瓊玉膏如何干預(yù)下丘腦炎癥變化延緩衰老的作用機(jī)制,最終確定下丘腦炎癥變化引起機(jī)體衰老的作用機(jī)制。
結(jié)果:
1.對(duì)前期實(shí)驗(yàn)查找到瓊玉膏組與模型組的295種差異蛋白進(jìn)行分析,成功篩選出差異倍數(shù)≥1.30的差異蛋白。
4、2.通過對(duì)篩選出差異倍數(shù)≥1.30的差異蛋白并進(jìn)行排序比對(duì)、查閱差異蛋白相關(guān)延緩衰老文獻(xiàn)、生物信息學(xué)分析,成功找出下丘腦炎癥通路相關(guān)蛋白NF-κB蛋白、PIP5K1C蛋白、PTPRC/CD45蛋白。
NF-κB蛋白的活化是炎癥反應(yīng)的典型表現(xiàn),通過檢測(cè)NF-κB蛋白的激活程度可以反應(yīng)機(jī)體的炎癥狀態(tài);PIP5K1C蛋白和PTPRC/CD45蛋白在機(jī)體的抗炎過程中均有一定的積極作用,二者的表達(dá)量在一定程度上反映了機(jī)體的抗炎能力。
5、r> 3.對(duì)NF-κB蛋白、PIP5K1C蛋白、PTPRC/CD45蛋白進(jìn)行Western Blot和Q-PCR檢測(cè),發(fā)現(xiàn)瓊玉膏抑制了NF-κB蛋白在衰老過程中的表達(dá),減緩了PIP5K1C蛋白和PTPRC/CD45蛋白在衰老過程中的下降程度。
結(jié)論:
經(jīng)過瓊玉膏干預(yù),下調(diào)NF-κB蛋白(引發(fā)下丘腦炎癥的炎癥激活蛋白)的表達(dá);上調(diào)PIP5K1C蛋白和PTPRC/CD45蛋白(對(duì)抗機(jī)體炎癥反應(yīng)或者炎癥相關(guān)疾病的蛋白)的
6、表達(dá)。通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)其作用機(jī)制可以更加明確地解釋為抑制和減緩,即抑制致炎蛋白(如NF-κB蛋白)在外界不良環(huán)境影響下的激活程度,減緩抗炎蛋白(如PIP5K1C蛋白、PTPRC/CD45蛋白)在外界不良環(huán)境影響下的衰退程度。通過對(duì)下丘腦炎癥通路相關(guān)蛋白的雙向調(diào)控減輕下丘腦炎癥反應(yīng),避免下丘腦炎癥反應(yīng)引起的機(jī)體生理功能的衰退,進(jìn)而達(dá)到延緩機(jī)體衰老的目的。
下丘腦炎癥反應(yīng)可以引起機(jī)體衰老,其作用機(jī)制跟許多炎癥通路相關(guān)蛋白有一定關(guān)系
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