應激對大鼠延髓和下丘腦胃機能調(diào)控中樞神經(jīng)通路影響的研究.pdf

1、束縛-浸水應激(Restraint Water-Immersion Stress，RWIS；水溫21±1℃)是一種心理和軀體的復合應激模型，刺激強度較大。該模型可在短時間內(nèi)導致大鼠情緒改變、體溫降低和胃腸機能紊亂，包括胃運動機能亢進、胃酸分泌增多、急性胃粘膜損傷等。
　　傳統(tǒng)觀點認為應激(stress)主要啟動“下丘腦-腺垂體-腎上腺皮質(zhì)”軸，通過引發(fā)一系列生物學反應進而改變器官系統(tǒng)的功能狀態(tài)，從而使機體內(nèi)環(huán)境保持穩(wěn)態(tài)以應對應激性

2、刺激。而眾多研究表明 RWIS主要誘導副交感神經(jīng)系統(tǒng)的活動加強。
　　延髓是胃機能初級調(diào)控中樞，其內(nèi)的迷走神經(jīng)背核和疑核發(fā)出迷走神經(jīng)中的副交感纖維到胃，支配胃的活動。延髓的孤束核是內(nèi)臟感覺信息的接受核團，來自胃腸的感覺信息經(jīng)孤束核中繼向更高級中樞傳導。由此可見，延髓是直接對胃機能狀態(tài)進行調(diào)控的神經(jīng)中樞。下丘腦是調(diào)節(jié)內(nèi)臟活動的較高級中樞。形態(tài)學研究發(fā)現(xiàn)，RWIS在導致大鼠產(chǎn)生應激性胃粘膜損傷的同時，還引起大鼠延髓迷走神經(jīng)背核、孤束核

3、、最后區(qū)及下丘腦室旁核、視上核內(nèi) Fos表達加強?？梢娧铀?、下丘腦胃機能調(diào)控中樞內(nèi)神經(jīng)元活動加強與應激性胃粘膜損傷的產(chǎn)生具有密切關(guān)聯(lián)。
　　眾多研究表明，室旁核與迷走神經(jīng)背核、孤束核間均存在雙向的纖維聯(lián)系。室旁核和視上核都是位于下丘腦視前區(qū)的兩個非常重要的神經(jīng)核團，其大細胞性分泌神經(jīng)元分泌的抗利尿激素和催產(chǎn)素分別經(jīng)室旁垂體束和視上垂體束運輸至神經(jīng)垂體。研究表明室旁核和視上核是下丘腦在RWIS狀態(tài)下參與胃機能調(diào)控的兩個神經(jīng)核團。既然

4、室旁核與延髓部位纖維聯(lián)系密切，那么視上核也應該與延髓部位的核團之間存在纖維聯(lián)系，有研究已經(jīng)證明它和孤束核之間是有直接纖維聯(lián)系，那么還有一個問題需要解決:視上核與迷走神經(jīng)背核之間是否存在纖維聯(lián)系?
　　越來越多的研究表明應激能改變軸漿運輸和突觸的機能狀態(tài)，在一定情況下甚至還能使“沉默突觸”激活。那么RWIS這種強大的復合型應激是否也會對神經(jīng)通路產(chǎn)生類似的影響，從而促使應激性胃粘膜損傷的產(chǎn)生?
　　另一個問題是，如果膈肌下切斷迷

5、走神經(jīng)，消除來自外周(胃腸)的應激反饋信息后，RWIS狀態(tài)下大鼠延髓和下丘腦對胃腸的調(diào)控會發(fā)生怎樣的變化?
　　針對以上提出的問題，本文分兩部分。
　　第一部分應用辣根過氧化物酶逆行追蹤方法探討兩個問題:(1)視上核與迷走神經(jīng)背核間是否存在纖維聯(lián)系。(2)RWIS是否對延髓、下丘腦兩個胃機能調(diào)控中樞間的神經(jīng)通路產(chǎn)生影響。將雄性Wistar大鼠隨機分為2組:束縛-浸水應激組，對照組。應激組動物，向迷走神經(jīng)背核內(nèi)微量注射HRP，

6、動物清醒后給予 RWIS3h，注射HRP48～60h后，過量戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉動物，快速心臟灌流固定腦組織、脫水處理，然后進行冰凍切片。漂浮切片進行HRP組化顯色。對照組動物除不進行RWIS外，其余操作均同應激組。
　　結(jié)果顯示，無論是對照組還是應激組，在下丘腦室旁核、視上核均發(fā)現(xiàn) HRP標記的神經(jīng)元胞體；應激組室旁核內(nèi) HRP標記的神經(jīng)元胞體數(shù)目較對照組顯著增多(P＜0.01)，而視上核內(nèi)無顯著性變化；同側(cè)室旁核 HRP標記

7、的神經(jīng)元胞體數(shù)較對側(cè)室旁核多(P＜0.01)。這些結(jié)果提示:視上核有向迷走神經(jīng)背核投射的神經(jīng)元，說明視上核和室旁核在胃機能調(diào)控中都起重要作用；RWIS使室旁核到迷走神經(jīng)背核的神經(jīng)纖維末梢(指“沉默末梢”被激活成“活性末梢”的數(shù)目)增多了，說明室旁核與迷走神經(jīng)背核之間神經(jīng)通路在RWIS過程中對胃腸調(diào)控起重要的作用。
　　第二部分應用免疫組織化學方法探討切斷膈肌下迷走神經(jīng)阻斷來自胃腸的應激反饋信息和傳出指令后，在束縛-浸水應激狀態(tài)下，

8、大鼠延髓、下丘腦神經(jīng)元 Fos的表達情況，從另一方面研究應激反饋信息對中樞調(diào)控的影響。本研究將雄性Wistar大鼠隨機分2組:手術(shù)組、對照組。手術(shù)組切斷雙側(cè)膈肌下迷走神經(jīng)，對照組同樣暴露神經(jīng)但不切斷。術(shù)后6 d進行實驗，將大鼠束縛-浸水應激3 h后處死，測腹腔溫度；取胃，觀察胃粘膜損傷程度；取腦，應用免疫組化染色方法觀察兩組動物延髓、下丘腦神經(jīng)元的Fos表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，手術(shù)組動物延髓迷走神經(jīng)背核、孤束核、下丘腦室旁核 Fos表達較對照組