雙胸蚓組織熱穩(wěn)定性核酸酶的分離純化及其cDNA克隆.pdf

1、山西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文雙胸蚓組織熱穩(wěn)定性核酸酶的分離純化及其cDNA克隆姓名：張建林申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生理學(xué)指導(dǎo)教師：牛勃程牛亮20090506山西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文3、通過對比實(shí)驗(yàn)確定了酶活性最適溫度為25℃、最適pH值pH5055之間；對熱穩(wěn)定，70。C保溫60min仍具85％以上的殘余活性；pH4090之間核酸酶穩(wěn)定性比較好；M92、Mn2、ca2對酶有激活作用，Zn2、Fe2、Cu2對酶有抑制作用；對常用有機(jī)溶劑甲醇、

2、乙醇和丙酮不敏感；單鏈線狀DNA為雙胸蚓組織熱穩(wěn)定性核酸酶最佳底物；以單鏈線狀DNA為底物測得Km值為0048mg／ml。4、雙胸蚓組織熱穩(wěn)定性核酸酶對幾種常見病原微生物：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌以及乙肝病毒和流感病毒都有不同程度的殺滅作用，其中對白色念珠菌和流感病毒殺滅作用相對較弱。5、克隆了雙胸蚓組織熱穩(wěn)定性核酸酶的eDNA序列(含3’端非翻譯區(qū))。序列為864bp，包含一個(gè)729bp的開放閱讀框ORF(1729bp)

3、，編碼243個(gè)氨基酸。6、利用生物軟件進(jìn)行分析，獲得eDNA序列堿基組成、密碼子使用頻率和酶切位點(diǎn)等詳細(xì)數(shù)據(jù)以及蛋白質(zhì)理論分子量、等電點(diǎn)和氨基酸組成等情況。蛋白穩(wěn)定性分析結(jié)論為性質(zhì)穩(wěn)定。利用BLAST軟件，將雙胸蚓組織熱穩(wěn)定性核酸酶的蛋白序列與NCBI蛋白序列數(shù)據(jù)庫比對，沒有檢索到與之相匹配的任何蛋白。二級結(jié)構(gòu)分析獲知蛋白主要由無規(guī)卷曲組成(約占50％)，5個(gè)a一螺旋中心(約占20％)，其余為20％左右為片層結(jié)構(gòu)。結(jié)論1、成功純化了一種