壇紫菜R-藻紅蛋白的分離純化及其穩(wěn)定性研究.pdf

1、本文研究了從壇紫菜中提取，分離，純化R-藻紅蛋白的方法，并對其穩(wěn)定性進(jìn)行了分析和探討。 分別采用反復(fù)凍融法、滲透壓破碎法、超聲波破碎法提取壇紫菜中R-藻紅蛋白，研究結(jié)果表明反復(fù)凍融法在-20℃與4℃之間，冷凍時(shí)間為3h，反復(fù)凍融6次效果最好。 采用硫酸銨鹽析法、結(jié)晶法及超濾法對壇紫菜R-藻紅蛋白進(jìn)行分離，結(jié)果表明，先用35％飽和度的硫酸銨鹽析除去雜蛋白和部分藻藍(lán)蛋白，再用60％飽和度的硫酸銨沉淀R-藻紅蛋白，此后利用

2、超濾進(jìn)行脫鹽并濃縮后，純度達(dá)到1.80。 通過一步羥基磷灰石法實(shí)現(xiàn)壇紫菜R-藻紅蛋白與R-藻藍(lán)蛋白及別藻藍(lán)蛋白的完全分離，使其純度達(dá)到3.20，再經(jīng)DEAE SepharoseF.F.離子交換柱純化，純度達(dá)到5.30，大于國際通用標(biāo)準(zhǔn)(4.0)。其最大吸收峰位于565nm，室溫?zé)晒獍l(fā)射峰位于575nm附近。用脲對壇紫菜R-藻紅蛋白純品進(jìn)行變性處理后，通過SDS-PAGE分析，壇紫菜R-藻紅蛋白含有α，β，γ三個(gè)亞基，分子量分別

3、是18.0kDa、19.0kDa和37.0kDa。 對影響壇紫菜R-藻紅蛋白穩(wěn)定性的諸多因素進(jìn)行研究，結(jié)果表明，壇紫菜R-藻紅蛋白在40℃以下、可見光強(qiáng)2000lux以內(nèi)及pH5.0～8.0條件下相對穩(wěn)定，適宜對其進(jìn)行加工，但時(shí)間不宜過長，其中4℃、pH7.0的避光條件為保存壇紫菜R-藻紅蛋白的最佳條件，同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)壇紫菜R-藻紅蛋白所含兩種藻膽色素的熱穩(wěn)定性關(guān)系為：PUB>PEB；此外，壇紫菜R-藻紅蛋白中不宜添加Fe2+、