尿毒癥毒素硫酸鹽對甲酚促心臟舒張功能不全及其機制研究.pdf

1、目的：
　　慢性腎病（chronic kidney disease，CKD）患者心血管疾?。╟ardiovascular disease，CVD）發(fā)生率是普通人群的10~30倍，CVD病死率更是占CKD全部死因的50%。CKD對心血管系統(tǒng)的損害具體體現(xiàn)在促進心肌纖維化和心力衰竭（heart failure，HF）、促進動脈粥樣硬化（atherosclerosis）、增加大動脈僵硬度（arteril stiffness）、促進血管鈣

2、化（vascular calcification）等方面。其中HF是CKD患者的主要心源性死因，其所占比例高達30%。以往對CKD患者HF的研究主要集中在收縮功能不全，以射血分數(shù)（ejection fraction，EF）作為主要評價指標。近年的研究顯示，舒張功能不全（diastolic dysfunction，DD）在CKD患者中的發(fā)生率亦顯著上升，且其發(fā)生時間更為提早，提示其可能為CKD患者HF發(fā)生發(fā)展的始動環(huán)節(jié)。
　　除高血

3、壓、糖尿病、高脂血癥、腎素-血管緊張素系統(tǒng)（renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS）異常激活等傳統(tǒng)危險因素可能參與CKD患者HF的發(fā)生發(fā)展外，近年研究顯示，特異潴留于CKD患者體內(nèi)的尿毒癥毒素（uremic toxins）也參與HF進展，與此相關(guān)的尿毒癥性心肌病已受臨床關(guān)注多年。臨床研究已證實其中主要毒素硫酸吲哚酚（indoxyl-sulfate，IS）與DD存在正相關(guān)。本課題旨在闡明另一主要

4、尿毒癥毒素硫酸鹽對甲酚（p-cresyl sulfate，PCS）在CKD患者DD發(fā)生發(fā)展過程中的作用及機制。
　　方法：
　　本論文擬通過臨床研究及在體動物實驗兩方面研究PCS促心臟舒張功能不全的作用效應(yīng)及機制：
　　臨床研究：1）借助我院腎臟內(nèi)科完善的血液透析平臺，收集行規(guī)律血液透析的病人共170例（血透時間≥6月），排除既往心血管疾病史、惡性腫瘤病史、合并系統(tǒng)性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合癥等；2）通過超聲技術(shù)

5、測定各例患者升主動脈內(nèi)徑（aorta ascendens，AAO）、左房內(nèi)徑（left atrial，LA）、左室舒張末內(nèi)徑（left ventricular diastolic diameter，LVDD）、左室收縮末內(nèi)徑（left ventricular systolic diameter，LVSD）、室間隔內(nèi)徑（interventricular septum，IVS）、左室后壁厚度（Left ventricular posteri

6、or wall，LVPW）、左室射血分數(shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）等參數(shù)，其中LVEF<50%作為排除標準；同時運用脈沖多普勒測量二尖瓣舒張早期血流峰值流速（E）、舒張晚期血流峰值速度（A），組織多普勒測定二尖瓣環(huán)舒張早期血流速度（E’）和晚期峰值血流速度（A’），計算E/E’比值，判定各例患者左室舒張功能狀態(tài)；3）收集各例患者一般情況包括年齡、性別、糖尿病、高血壓、BMI指數(shù)等，

7、以及常規(guī)生化指標包括肝功能、腎功能、電解質(zhì)、血脂、心功能等；4）收集各例患者血漿，運用高效液相－串聯(lián)質(zhì)譜（high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry，HPLC-MS/MS）方法對患者體內(nèi)游離PCS及總PCS濃度行定量檢測；5）多因素回歸分析PCS濃度與舒張功能不全的潛在相關(guān)性。
　　在體動物實驗：1）分別建立正常對照（control）、單側(cè)腎切除（

8、unilateral nephrectomy，UNX）、5/6腎切除（5/6 nephrectomy，CRF）小鼠模型，各組小鼠予以單次PCS灌胃（50mg/kg），于給藥后0，15，30，60，120，180，240分鐘分別行眼眶靜脈叢穿刺采血，分離血漿，運用HPLC-MS/MS方法檢測其中PCS濃度水平，得到PCS在不同腎功能狀態(tài)下小鼠體內(nèi)的代謝動力學(xué)參數(shù)；2）在得到有關(guān)PCS代謝動力學(xué)參數(shù)后，建立最佳單純PCS干預(yù)小鼠模型，運用心

9、臟超聲、壓力導(dǎo)管、組織病理、分子免疫等方法研究PCS促舒張功能不全效應(yīng)及機制。
　　結(jié)果：
　　1）多因素回歸分析發(fā)現(xiàn)，CKD患者體內(nèi)游離PCS濃度水平與左室舒張功能不全存在相關(guān)性；
　　2）PCS在正常對照、單側(cè)腎切除、5/6腎切除小鼠體內(nèi)的半衰期分別為0.48±0.02、0.79±0.04、12.07±0.12小時，提示單側(cè)腎切除小鼠可能為研究PCS在體致病效應(yīng)的最佳模型；
　　3）在體實驗證實單純PCS干預(yù)