基于“毒損腎絡(luò)”理論研究槲皮素對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的腎小球足細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的抑制作用.pdf

1、目的：
　　基于“毒損腎絡(luò)”理論研究槲皮素（Quercetin，Qu）不同給藥時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(Transforming growth factor-β1，TGF-β1)誘導(dǎo)的腎小球足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化（Epithelial Mesenchymal Transition，EMT）的抑制作用。
　　方法：
　　將體外原代培養(yǎng)的細(xì)胞用光鏡、電鏡及免疫組織化學(xué)染色法進(jìn)行鑒定，確定為足細(xì)胞后，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、Qu先干預(yù)組

2、、Qu同時(shí)干預(yù)組和Qu后干預(yù)組共5組。對(duì)照組常規(guī)培養(yǎng)；模型組用5ng/ml TGF-β1誘導(dǎo)48h；先干預(yù)組用50μmol/L Qu干預(yù)24h后，再用5ng/ml TGF-β1繼續(xù)誘導(dǎo)24h；同時(shí)干預(yù)組加入50μmol/L Qu和5ng/ml TGF-β1干預(yù)48h；后干預(yù)組先用5ng/ml TGF-β1干預(yù)24h，再用50μmol/L Qu干預(yù)24h。將上述各組細(xì)胞分別用Western blot、RT-PCR技術(shù)檢測(cè)足細(xì)胞裂孔膜蛋白（

3、Nephrin）、Wilms瘤抑癌因子-1（WT-1）和足細(xì)胞 EMT標(biāo)志物波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（alpha smooth muscle Actin,α-SMA）的蛋白及mRNA表達(dá)量，選擇相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行組間差異比較。
　　結(jié)果：
　　1．經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察（光鏡、電鏡）和免疫組化鑒定，確定所培養(yǎng)細(xì)胞為足細(xì)胞。正常足細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，呈分叉狀，有較多細(xì)而長(zhǎng)的突起，典型者可見多條“樹枝樣”稠而密的突

4、起。經(jīng) TGF-β1誘導(dǎo)后，足細(xì)胞的胞體變大，突起縮短甚至消失。Qu不同時(shí)間干預(yù)組的足細(xì)胞形態(tài)均有所改善，表現(xiàn)為細(xì)胞突起較多，部分細(xì)胞可見“樹枝樣”足細(xì)胞典型結(jié)構(gòu)，其中以Qu先干預(yù)組最為明顯。
　　2.蛋白表達(dá)量：與對(duì)照組相比較，模型組足細(xì)胞Nephrin、WT-1明顯降低（P均＜0.01），而Vimentin、α-SMA明顯升高（P均＜0.01）。與模型組相比，三種不同干預(yù)方法下，Nephrin蛋白表達(dá)量以后干預(yù)組最高（P＜0.

5、01）；WT-1蛋白表達(dá)量以同時(shí)干預(yù)組最高（P＜0.01）；Vimentin蛋白表達(dá)量以先干預(yù)組最低（P＜0.01）；α-SMA蛋白表達(dá)量以先干預(yù)組最低（P＜0.01）。
　　3.mRNA表達(dá)量：與對(duì)照組相比較，模型組足細(xì)胞Nephrin和WT-1的mRNA表達(dá)量明顯降低（P均＜0.01）；而Vimentin、α-SMA的mRNA表達(dá)量均明顯升高（P均＜0.01）。與模型組相比，三種不同干預(yù)方法下，Nephrin和WT-1的mRN

6、A表達(dá)量均以先干預(yù)組最高（P均＜0.01）；Vimentin和α-SMA的mRNA表達(dá)量均以先干預(yù)組最低（P均＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1．聯(lián)合運(yùn)用酶消化法、差異過篩法和鼠尾膠原包被法是一種操作相對(duì)簡(jiǎn)便、重復(fù)性較好的足細(xì)胞原代培養(yǎng)方法，WT-1、Nephrin可作為足細(xì)胞鑒定的標(biāo)記蛋白。
　　2.TGF-β1能夠誘導(dǎo)足細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，促進(jìn)足細(xì)胞EMT的發(fā)生發(fā)展。
　　3.Qu能夠抑制TGF-β1誘導(dǎo)的足細(xì)胞