氟伐他汀對高糖誘導(dǎo)足細(xì)胞向間葉細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分：高糖對足細(xì)胞向間葉細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響
　　 目的：通過觀察高糖是否引起小鼠足細(xì)胞發(fā)生上皮-間葉細(xì)胞轉(zhuǎn)分化現(xiàn)象，探討糖尿病腎小球損傷的可能機(jī)制。
　　 方法：以小鼠永生化足細(xì)胞株為研究對象，予不同濃度葡萄糖(12.5mM，25mM，50mM)處理該細(xì)胞36小時(shí)，并設(shè)低糖(5.6mM)和甘露醇(50mM)處理組為對照組。采用蛋白免疫印跡和間接免疫熒光染色方法檢測a-平滑肌細(xì)胞肌動蛋白

2、(α-SMA)，F(xiàn)N(fibronectin)，CD2-相關(guān)蛋白(CD2AP)和Wilms'腫瘤1基因(WT-1)蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：低糖(5.6mM)和甘露醇(50mM)處理?xiàng)l件下小鼠足細(xì)胞表達(dá)高水平WT-1、CD2AP，基本不表達(dá)α-SMA和FN;而予不同濃度葡萄糖處理36小時(shí)后，足細(xì)胞中a-SMA和FN表達(dá)水平呈劑量依賴性升高(P

3、例明顯增加(P　　 結(jié)論：在高糖條件下，足細(xì)胞發(fā)生向間葉細(xì)胞表型的轉(zhuǎn)分化可能是引起足細(xì)胞功能失調(diào)，進(jìn)而引起糖尿病腎小球損傷發(fā)生的作用機(jī)制之一。
　　 第二部分：氟伐他汀對高糖誘導(dǎo)足細(xì)胞向間葉細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響
　　 目的：通過體內(nèi)體外研究探討他汀類藥物保護(hù)高糖誘導(dǎo)的糖尿病腎小球損傷的可能機(jī)制。
　

4、　 方法：體外部分：給予25mM D-葡萄糖刺激的同時(shí)給予不同濃度氟伐他汀處理該細(xì)胞36小時(shí)。采用蛋白免疫印跡檢測α-平滑肌細(xì)胞肌動蛋白(α-SMA)，F(xiàn)ibemectin(FN)，CD2-相關(guān)蛋白(CD2AP)和Wilms'腫瘤1基因(WT-1)蛋白的表達(dá)。間接免疫熒光檢測a-SMA。體內(nèi)部分：C57BL/6小鼠隨機(jī)分為正常組(n=4)，糖尿病未治療組(n=5)，糖尿病氟伐他汀低劑量(5mg·kg-1·d-1)灌胃組(n=5)，糖尿

5、病氟伐他汀高劑量(20mg·kg-1·d-1)灌胃組(n-5)。于4周，8周，12周收集小鼠的尿液檢測尿蛋白值。在此基礎(chǔ)上，另一批小鼠(分組為：正常對照組(n=4)，糖尿病組(n=5)和氟伐他汀低劑量組(n=5))，選取8周作為時(shí)間點(diǎn)猝死，透射電鏡觀察足細(xì)胞形態(tài)變化。間接免疫熒光檢測α-平滑肌細(xì)胞肌動蛋白(α-SMA)，F(xiàn)ibernectin(FN)，CD2-相關(guān)蛋白(CD2AP)和Wilms'腫瘤1基因(WT-1)蛋白的表達(dá)。

6、　　 結(jié)果：
　　 體外部分：低糖(5.6mM)條件下小鼠足細(xì)胞表達(dá)高水平WT-1、CD2AP，基本不表達(dá)α-SMA和FN;予25mM葡萄糖處理36小時(shí)后，足細(xì)胞中α-SMA和FN表達(dá)水平升高。同時(shí)可抑制WT-1和CD2AP的表達(dá)。在此實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上給予不同濃度的氟伐他汀處理，結(jié)果表明氟伐他汀可以部分逆轉(zhuǎn)高糖的上述作用。
　　 體內(nèi)部分：糖尿病小鼠蛋白尿較正常對照組增高(p<0.05)，8周時(shí)氟伐他汀組小鼠蛋白尿均較糖尿病

7、組小鼠下降(p<0.05)；8周時(shí)正常對照組小鼠足細(xì)胞足突排列整齊，足細(xì)胞表達(dá)高水平WT-1、CD2AP，基本不表達(dá)α-SMA和FN;糖尿病小鼠腎小球足細(xì)胞足突消失融合，WT-1，CD2AP表達(dá)下降，α-SMA和FN表達(dá)上升；氟伐他汀大劑量組足突較高糖組改善，WT-1和CD2AP表達(dá)較高糖組上升，α-SMA和FN較高糖組下降。
　　 結(jié)論：體外和體內(nèi)研究表明：氟伐他汀可以在一定程度上抑制高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞發(fā)生向間葉細(xì)胞表型的轉(zhuǎn)分化