AG490對高糖誘導的人晶狀體上皮細胞向間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的抑制作用.pdf

1、目的：
　　 本實驗擬研究在高糖誘導人晶狀體上皮細胞向間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的過程中,JAK-STAT通路的作用及AG490對此過程的影響。
　　 研究方法：
　　 低糖(5.5mM)DMEM培養(yǎng)液體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細胞系SRA01/04。高糖(30.5mM)處理細胞,按照是否加入AG490及其濃度的不同分為實驗組和對照組。
　　 1、CCK-8試劑盒檢測晶狀體上皮細胞的活性,選擇適當?shù)腁G490的作用濃度和作用時

2、間;
　　 2、細胞劃痕實驗檢測細胞遷移能力的變化;
　　 3、RT-PCR方法半定量檢測TGF-β1、FN、α-SMA的mRNA表達量變化。
　　 結果：
　　 隨著AG490濃度(10、25、50、100μM)的增加和處理時間(6、12、24、48、72h)的延長,細胞活性呈下降趨勢,都未達到LD50,后續(xù)實驗選擇實驗組AG490濃度為10和50μM,處理時間分別為6、12、24和48小時。隨著時間的

3、延長,各組劃痕的閉合程度和轉(zhuǎn)分化標志物的表達量都有所不同,在不同的處理時間(6、12、24、48h),高糖組與低糖組相比,細胞的遷移能力增加(P＜0.05),TGF-β1、FN、α-SMA表達量增高(P＜0.05);AG490組與HG組相比,細胞的遷移能力降低(P＜0.05),TGF-β1、FN、α-SMA表達量下降。其中AG50組與高糖組相比,TGF-β1、FN、α-SMA的相對表達量在各時間點差異顯著(P＜0.05);AG10組與高

4、糖組相比,TGF-β1的相對表達量在12、24和48小時差異顯著(P＜0.05),在6小時差異不顯著(P＞0.05);FN的相對表達量在6、12、24和48小時差異顯著(P＜0.05);α-SMA的相對表達量在48小時差異顯著(P＜0.05),在6、12和24小時差異不顯著(P＞0.05)。
　　 結論：
　　 JAK-STAT通路通過影響TGF-β1和細胞外基質(zhì)轉(zhuǎn)錄表達參與了高糖誘導的人晶狀體上皮細胞向間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的過程