TGFβ與創(chuàng)傷后晶狀體上皮細胞轉分化.pdf

1、目的： 對超聲乳化術后囊袋與正常晶狀體囊袋組織所表達的基因進行篩查分析，探索調控晶狀體上皮細胞創(chuàng)傷后增生、分化、轉分化的潛在因素。觀察TGFβ2作用于人晶狀體上皮細胞后，通路轉導蛋白的動態(tài)表達，及其對細胞周期和轉分化特異性標記物表達的影響。嘗試活體觀察不同分區(qū)晶狀體上皮細胞手術創(chuàng)傷后反應差異。探索TGFβ對晶狀體上皮細胞轉分化的效應特點和機制。 方法： 1.使用DNA基因芯片技術對兔眼超聲乳化術后14d的晶狀體囊

2、袋組織和未手術眼囊袋組織所表達的差異基因進行篩查。 2.體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞中添加10ng/mlhTGFβ2，用RT-PCR方法測定30min、1h、2h、8h、16h、24h等不同時點Smad4mRNA的表達，用Westernblot和免疫組織化學方法觀察上述時點p-Smad2/3的表達。 3.利用流式細胞技術測定TGFβ2刺激晶狀體上皮細胞后，24h和72h的細胞周期分布變化。RT-PCR檢測24h、48h和7

3、2h時點αSMA和COL-ⅠmRNA表達，免疫組織化學方法觀察αSMA和COL-Ⅰ蛋白表達。 4.將晶狀體中央前囊膜片再植入于兔眼超聲乳化術后囊袋中，組織切片觀察術后再植片與赤道部細胞形態(tài)變化，免疫組織化學法觀察兩者Smad4表達的差異。 結果： 1.DNA基因芯片檢測超聲乳化術后囊袋組織，可發(fā)現(xiàn)上調基因47個，下調基因11個(以2.0倍顯著差異水平篩選)。其中包括TGFβ通路蛋白基因Smad7表達明顯上調2.2

4、倍；以及與細胞分裂轉化相關的基因，如Fos、Csl等。 2.人晶狀體上皮細胞添加了外源性hTGFβ2后1h，即可出現(xiàn)Smad4mRNA表達轉錄強度增高(0.18±0.02)，16h到達峰值(0.72±0.07)并至少持續(xù)至24h。與對照組存在顯著差異(P＜0.05)。30min測得p-Smad2/3的蛋白表達與對照組相似，但在2h后逐漸增強，與對照組出現(xiàn)明顯差異，16h達到峰值(2.53g/L)。免疫組織化學染色在16h有p-S

5、mad2/3顆粒胞漿表達，24h向核內聚集。 3.TGFβ2作用晶狀體上皮細胞后24h，測得G0-G1期細胞百分比55.26±1.76％、S期細胞24.16±3.13％；72h測得G0-G1期細胞百分比64.56±3.72％，S期細胞35.38±3.71％，G0/S與對照組相比有統(tǒng)計學顯著差異(P＜0.05)。TGFβ2作用晶狀體上皮細胞后，24h和48h表達αSMAmRNA(0.37±0.05和1.31±0.07)，與對照組(

6、0和0.98±0.02)存在統(tǒng)計學顯著差異(P＜0.05)；48h和72h表達COL-ⅠmRNA(0.62±0.20和0.54±0.21)，與對照組(0、0)存在統(tǒng)計學顯著差異(P＜0.05)；48h細胞形態(tài)發(fā)生不規(guī)則梭形改變；αSMA和COL-Ⅰ免疫組織化學染色陽性。 4.中央前囊膜片囊袋內再植入模型構建成功，術后14d，赤道部和中央前囊再植入片上細胞均出現(xiàn)增生和纖維化生表現(xiàn)；前囊再植片細胞Smad4表達陽性，赤道部為陰性。