Notch通路對高糖誘導(dǎo)人晶狀體上皮細(xì)胞凋亡中P53、BAX作用的研究.pdf

1、前言：
　　隨著人類生活環(huán)境的變化和年齡的老化，糖尿病的患病率大大增加，因此包括糖尿病性白內(nèi)障在內(nèi)的糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生率也相應(yīng)升高。最近研究表明，Notch通路在糖尿病腎病的發(fā)病機制中起著關(guān)鍵性的作用。本實驗擬研究高糖誘導(dǎo)人晶狀體上皮細(xì)胞后觀察在人晶狀體細(xì)胞中Notch通路對凋亡基因的調(diào)節(jié)作用。
　　研究方法：
　　培養(yǎng)液中葡萄糖終濃度實驗組(55.5mmol/L)對照組(25.5mmol/L)培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞，觀

2、察高糖對Notch、P53、BAX凋亡基因表達(dá)量變化情況;觀察在高糖條件下加入DAPT(Notch抑制劑)后P53、BAX凋亡基因表達(dá)量變化情況:
　　1、MTT法檢測不同糖濃度對細(xì)胞活性影響;
　　2、Real time RT-PCR方法定量分析高糖條件下Notch-1、P53、BAX凋亡基因mRNA表達(dá)量變化;
　　3、Western-blot方法檢測高糖條件下Notch-1、P53、BAX凋亡基因蛋白水平表達(dá)量變

3、化;
　　4、Real time RT-PCR方法定量分析高糖條件下Notch抑制后P53、BAX凋亡基因mRNA表達(dá)量變化;
　　5、Western-blot方法檢測高糖條件下Notch抑制后P53、BAX凋亡基因蛋白水平表達(dá)量變化;
　　6、流式細(xì)胞儀檢測高糖條件下對人晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的影響;及高糖條件下Notch抑制后對人晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的影響
　　結(jié)果：
　　隨著糖濃度的增加，細(xì)胞活性逐漸下降。

4、高糖不僅能使P53、BAX凋亡基因表達(dá)上調(diào)，同時能夠激活Notch信號通路，使Notch-1表達(dá)上調(diào)(P＜0.05）。在高糖條件下將Notch抑制后，P53、BAX凋亡基因表達(dá)下降，說明在高糖條件下將Notch抑制后P53、BAX凋亡基因的表達(dá)也能被抑制。
　　結(jié)論：
　　我們的研究結(jié)果顯示糖尿病性白內(nèi)障的發(fā)病學(xué)說除了滲透壓學(xué)說、蛋白質(zhì)糖激酶學(xué)說和氧化應(yīng)激學(xué)說外，晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡也是糖尿病性白內(nèi)障發(fā)生的重要誘發(fā)因素。隨著