迷走神經(jīng)調(diào)控對肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其相關(guān)機制研究.pdf

1、一、背景：
　　在我國肝細(xì)胞癌已成為排名第二位的癌癥死亡原因。外科手術(shù)是肝癌治療最為有效的手段，但是肝癌患者術(shù)后5年內(nèi)的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率卻高達(dá)80％，成為肝臟外科面臨的首要問題。肝癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲密切相關(guān)。近年來大量的研究證據(jù)表明，腫瘤的發(fā)生發(fā)展與神經(jīng)調(diào)控關(guān)系密切。本課題組前期的研究已經(jīng)證明交感神經(jīng)過度興奮可以加重肝臟損傷時發(fā)生的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而促進(jìn)肝癌的發(fā)生;另外，副交感神經(jīng)可以通過“膽堿能抗炎通路”抑制炎癥反應(yīng)的理論

2、已經(jīng)得到公認(rèn)。然而，迷走神經(jīng)能否對肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移產(chǎn)生影響，還未見文獻(xiàn)報道。
　　二、目的：
　　明確迷走神經(jīng)分布及調(diào)控與肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，探討關(guān)鍵迷走神經(jīng)遞質(zhì)對人肝癌細(xì)胞遷移、侵襲能力所產(chǎn)生的影響及其相關(guān)的分子機制。
　　三、方法：
　　1.收集原發(fā)及復(fù)發(fā)肝細(xì)胞癌患者的臨床手術(shù)切除標(biāo)本，利用免疫組織化學(xué)和Western Blot技術(shù)，探討迷走神經(jīng)與肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。
　　2.體外培養(yǎng)SMMC

3、-7721和HepG2兩種人肝癌細(xì)胞株，利用RT-PCR及免疫熒光技術(shù)檢測其中迷走神經(jīng)遞質(zhì)受體的表達(dá)表況，并用Transwell實驗探討迷走神經(jīng)遞質(zhì)在細(xì)胞水平對人肝癌細(xì)胞遷移、侵襲能力產(chǎn)生的影響。
　　3.分別在M受體和N受體激動劑和阻滯劑作用下培養(yǎng)SMMC-7721和HepG2兩種人肝癌細(xì)胞株，通過Transwell實驗，明確M受體和N受體激動或阻滯后對兩種細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響;利用CellTiter Blue細(xì)胞活性檢測技

4、術(shù)，探討迷走神經(jīng)遞質(zhì)及M受體和N受體的激動劑和阻滯劑對兩種細(xì)胞增殖能力的影響。最后，用WesternBlotting檢測在上述不同物質(zhì)作用下SMMC-7721和HepG2細(xì)胞中上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)標(biāo)志蛋白質(zhì)的表達(dá)變化情況。
　　四、結(jié)果：
　　1.在肝細(xì)胞癌腫瘤組織中有迷走神經(jīng)纖維末稍分布，且其分布密度高于癌旁肝組織。這種現(xiàn)象的發(fā)生率在復(fù)發(fā)病例中更高，與原發(fā)病例相比差異顯著。
　　2.SMMC-7721和HepG2細(xì)胞上

5、均有NK-1受體及膽堿能受體（包括M受體和N受體）表達(dá)。P物質(zhì)、乙酰膽堿、氯貝膽堿及尼古丁均能夠促進(jìn)SMMC-7721和HepG2細(xì)胞遷移和侵襲;其中，氯貝膽堿及尼古丁的這種作用可分別被阿托品和美加明所抑制。
　　3.P物質(zhì)、乙酰膽堿、氯貝膽堿、尼古丁、阿托品及美加明在短期內(nèi)（96小時）不對SMMC-7721和HepG2細(xì)胞的增殖產(chǎn)生影響。
　　4.P物質(zhì)、乙酰膽堿、氯貝膽堿及尼古丁可上調(diào)SMMC-7721和HepG2細(xì)胞中

6、N-Cadherin和Slug的表達(dá)，而下調(diào)E-Cadherin的表達(dá);其中，氯貝膽堿及尼古丁的這種作用可分別被阿托品和美加明所抑制。
　　五、結(jié)論：
　　1.在人肝細(xì)胞癌腫瘤組織中有迷走神經(jīng)纖維分布，且復(fù)發(fā)病例腫瘤組織中迷走神經(jīng)分布密度明顯增高，迷走神經(jīng)調(diào)控可能促進(jìn)了肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的形成。
　　2.人肝癌細(xì)胞株上有NK-1受體及多種膽堿能受體表達(dá);迷走神經(jīng)通過釋放P物質(zhì)及乙酰膽堿，分別與NK-1受體及膽堿能受體（M