同步雙脈沖胃電刺激對迷走神經(jīng)離斷大鼠胃動力的影響及其信號機制的研究.pdf

1、本文分為以下幾個部分:
　　第一部分:迷走神經(jīng)離斷大鼠胃動力及胃組織腸膠質(zhì)細胞的改變
　　目的:在不同病程的迷走神經(jīng)離斷大鼠中，觀察胃動力及胃組織腸膠質(zhì)細胞的改變。
　　方法:將30只雄性Sprague Dawley(SD)隨機分為正常對照組（control group，N=10），早期迷走神經(jīng)離斷組（early subdiaphragmantic vagotomy，ESDV，7天，N=10），晚期迷走神經(jīng)離斷組（te

2、rminal subdiaphragmatic vagotomy,TSDV,56天,N=10）。運用酚紅試餐檢測各組大鼠胃排空以評估胃動力的改變；利用RT-PCR、免疫熒光、透射電鏡等技術(shù)測定胃組織腸膠質(zhì)細胞中特異性表達物質(zhì)GFAP和S100B基因及蛋白的水平和腸膠質(zhì)細胞超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　結(jié)果:（1）與對照組相比，ESDV組胃排空加快但無統(tǒng)計學意義；TSDV組胃排空比ESDV組明顯延遲。（2）與對照組和ESDV組相比，TSDV

3、組GFAP mRNA表達量明顯下降；與ESDV組相比，TSDV組中S100B mRNA表達量明顯降低，但對照組和ESDV組中S100B mRNA表達量無明顯差異。（3）與ESDV組和對照組相比，GFAP與S100B蛋白表達量在TSDV組中顯著降低，但在ESDV與對照組中表達量未見明顯改變。（4）在ESDV組和TSDV組中，腸膠質(zhì)細胞超微結(jié)構(gòu)受損，表現(xiàn)為線粒體腫脹和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，中間絲數(shù)量減少。
　　結(jié)論:在迷走神經(jīng)離斷大鼠中，出現(xiàn)胃

4、排空延遲，并且腸膠質(zhì)細胞的結(jié)構(gòu)和功能受損；同時腸膠質(zhì)細胞具有一定代償能力。
　　第二部分:迷走神經(jīng)離斷大鼠胃組織GDNF及其下游信號通路PI3K/Akt的變化
　　目的:探索在迷走神經(jīng)離斷時大鼠胃組織中GDNF及其下游信號通路PI3K/Akt的改變。
　　方法:建立迷走神經(jīng)離斷大鼠模型。應用Western blot檢測胃組織GDNF、Cx43、p-Akt、pan-Akt和PGP9.5蛋白表達；應用RT-PCR檢測GDN

5、F、Cx43、pan-Akt和PGP9.5mRNA表達；應用免疫熒光方法檢測GDNF與GFAP的定位和蛋白表達；應用TUNEL檢測胃組織內(nèi)細胞凋亡。
　　結(jié)果:（1）與對照組比較，GDNF、Cx43、PGP9.5相對蛋白表達量在早期迷走神經(jīng)離斷組明顯下降；p-Akt和pan-Akt蛋白表達量在各組未見明顯差異。（2）與對照組相比，GDNF、Cx43、PGP9.5mRNA相對表達量在早期和晚期迷走神經(jīng)離斷組均明顯降低；pan-Akt

6、 mRNA表達量在早期和晚期迷走神經(jīng)離斷組均比在對照組增加。（3）GDNF和GFAP表達在EGC上；與對照組相比，GDNF、GFAP和PGP9.5蛋白表達量在早期和晚期迷走神經(jīng)離斷組明顯下降。（4）對照組中出現(xiàn)較少TUNEL(+)細胞，而在早期和晚期迷走神經(jīng)離斷組中，TUNEL(+)細胞數(shù)目明顯增加。
　　結(jié)論:在迷走神經(jīng)離斷時，GDNF及其下游PI3K/Akt信號通路的功能受損，胃組織中凋亡細胞數(shù)目明顯增加。
　　第三部分

7、:同步雙脈沖胃電刺激對迷走神經(jīng)離斷大鼠胃動力的影響及GDNF及其下游PI3K/Akt信號通路的研究
　　目的:探索同步雙脈沖胃電刺激能否改善迷走神經(jīng)離斷大鼠的胃動力異常及對胃組織內(nèi)EGC的作用，并進一步探討可能調(diào)控機制。
　　方法:雄性SD大鼠，共50只，分為5組，包括正常對照組（control，N=10），早期迷走神經(jīng)離斷組（ESDV，2周，N=10），早期迷走神經(jīng)離斷組+急性同步雙脈沖胃電刺激（ESDV+SSGES，30

8、min/天，2+2周，N=10），晚期迷走神經(jīng)離斷組（TSDV，4周，N=10），晚期迷走神經(jīng)離斷組+慢性同步雙脈沖胃電刺激（TSDV+LSSGES，30min/天，4+6周，N=10）。同步雙脈沖胃電刺激由一個長脈沖（300ms,4mA）和五個短脈沖（0.33ms,4mA,100Hz）組成。利用酚紅試餐測量胃排空以評估各組大鼠胃動力的改變，采用Western blot和RT-PCR技術(shù)測量胃組織Cx43、GDNF、p-Akt、pan-

9、Akt和PGP9.5的基因和蛋白表達，應用免疫熒光技術(shù)測量GDNF和GFAP、PGP9.5的定位和表達，應用透射電鏡觀察EGC超微結(jié)構(gòu)的改變，應用TUNEL技術(shù)測定細胞凋亡。
　　結(jié)果:（1）與對照組相比，胃排空在早期迷走神經(jīng)離斷組加快，在晚期迷走神經(jīng)離斷組延遲，LSGES顯著改善晚期迷走神經(jīng)離斷所致的胃排空延遲。（2）Western blot結(jié)果顯示Cx43蛋白在早期和晚期迷走神經(jīng)離斷組表達均顯著下降，但SSGES和LSGES明

10、顯增加其表達；與相應的對照組相比，SSGES和LSGES均明顯增加GDNF的蛋白表達量，但LSGES效果優(yōu)于SSGES；與晚期迷走神經(jīng)離斷組相比，LSGES顯著增加p-Akt的蛋白表達量；各組pan-Akt表達量均未見明顯差異；PGP9.5蛋白在早期迷走神經(jīng)離斷組表達量明顯降低，但SSGES能增加其表達。（3）RT-PCR結(jié)果顯示Cx43、GDNF和PGP9.5mRNA表達量在早期和晚期迷走神經(jīng)離斷組均顯著下降，但SSGES和LSGES

11、均明顯增加其表達。（4）免疫熒光結(jié)果顯示GDNF在EGC內(nèi)表達，且在早期和晚期迷走神經(jīng)離斷組表達量下降，而SSGES和LSGES在一定程度上增加其表達；PGP9.5表達量在早期和晚期迷走神經(jīng)離斷組明顯下降，在SSGES組和LSGES組表達量均明顯上升。（5）與對照組相比，迷走神經(jīng)離斷組有較多的TUNEL（+）細胞，而LSGES和SSGES均能明顯減少TUNEL（+）細胞。（6）在對照組中EGC胞內(nèi)含有豐富的線粒體、光面和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、中間